布鲁氏菌OMP25的表达、纯化、鉴定及多克隆抗体的制备

发布时间：2018-11-10 20:48

【摘要】：目的表达和纯化布鲁氏菌OMP25重组蛋白并制备OMP25多克隆抗体,为建立布鲁氏菌病的诊断方法奠定基础。方法采用PCR方法扩增M16羊布鲁氏菌标准菌株的OMP25外膜蛋白基因,连接载体质粒pET-30a(+)并导入受体细胞DH5α中,构建重组PET-30a(+)-OMP25质粒,转化至Rosetta(DE3)菌株,收集表达的蛋白,用Ni2+NTA柱纯化试剂盒进行纯化。用纯化的重组蛋白免疫家兔,制备OMP25多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性。结果成功构建重组质粒PET-30a(+)-OMP25,导入受体细胞Rosetta(DE3),获得重组蛋白,纯化后免疫家兔,制备的OMP25多克隆抗体与OMP25重组蛋白发生特异性反应。结论成功构建重组质粒PET-30a(+)-OMP25,表达的重组蛋白具有免疫原性,并制备了高纯度、高效价的多克隆抗体,为布病免疫诊断方法的建立奠定了基础。
[Abstract]:Objective to express and purify the recombinant protein of brucellosis OMP25 and to prepare OMP25 polyclonal antibody, so as to establish a diagnostic method for brucellosis. Methods the OMP25 outer membrane protein gene of standard strain of Brucella sheep M16 was amplified by PCR. The plasmid pET-30a () was ligated into the receptor cell DH5 伪. The recombinant PET-30a () -OMP25 plasmid was constructed and transformed into Rosetta (DE3) strain. The expressed protein was purified by Ni2 NTA column purification kit. OMP25 polyclonal antibody (, Western blot) was prepared by immunizing rabbits with purified recombinant protein. Results Recombinant plasmid PET-30a ()-OMP25, was successfully constructed and transfected into receptor cell Rosetta (DE3). The recombinant protein was purified and immunized rabbits. The OMP25 polyclonal antibody was specifically reacted with OMP25 recombinant protein. Conclusion the recombinant protein expressed by recombinant plasmid PET-30a ()-OMP25, has immunogenicity, and the polyclonal antibody with high purity and high titer has been prepared, which lays a foundation for the establishment of immune diagnosis method for brucellosis.
【作者单位】： 潍坊医学院医学检验学系;潍坊医学院医学附属医院检验科;
【分类号】：R516.7

【相似文献】

相关期刊论文 前4条

1 马学平;高建炜;詹军;李丽;;宁夏地区布鲁氏菌临床分离株OMP25基因序列特征分析[J];中国病原生物学杂志;2013年12期

2 石艳春;韩X;郑源强;吴岩;毕力夫;;羊布鲁氏菌omp25基因原核表达载体的构建与鉴定[J];内蒙古医学院学报;2012年02期

3 张亚丽;诸婷婷;王慧;张科;陈创夫;王梦远;王远志;;布鲁氏菌omp25重组BCG的构建及其疫苗作用检测[J];中国病原生物学杂志;2013年12期

4 ;[J];;年期

相关会议论文 前1条

1 黄小强;赵敏;王少伟;张燃;刘瑞田;盛金良;王鹏雁;陈创夫;;用噬菌体展示技术筛选布鲁氏菌侵染巨噬细胞过程中与OMP25作用的受体[A];2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会论文集[C];2012年

相关博士学位论文 前2条

1 乔凤;外膜蛋白Omp25在布鲁氏菌毒力及免疫保护中的作用研究[D];吉林大学;2009年

2 曹涤非;流产布鲁氏菌Omp25与L7/L12促巨噬细胞凋亡的分子机制[D];东北农业大学;2012年

相关硕士学位论文 前7条

1 陈禹;布鲁氏菌Omp25蛋白抑制巨噬细胞分泌IL-12的分子机制研究[D];西北农林科技大学;2015年

2 马晓娟;慢病毒介导的过表达Omp25基因对小胶质细胞的影响及其分子机制[D];宁夏医科大学;2016年

3 朱华培;布鲁氏菌OMP25影响巨噬细胞基因表达谱的初步研究[D];海南大学;2016年

4 张彦婷;布鲁菌的分离鉴定及OMP25基因的克隆[D];内蒙古农业大学;2009年

5 张沾;布鲁氏菌Omp25对胚胎滋养层细胞炎性机制初步研究[D];石河子大学;2011年

6 陈瑞花;布鲁氏菌omp25基因缺失株的构建及对细胞自噬的影响[D];石河子大学;2013年

7 刘艳琴;牛布鲁氏菌Omp25基因的克隆与原核表达及抗原特异性研究[D];内蒙古农业大学;2011年

，

本文编号：2323577