RNA恒温扩增实时检测技术鉴定常见致病非结核分枝杆菌研究

发布时间：2018-11-17 08:48

【摘要】：目的：以分枝杆菌常用的分子菌种鉴定靶标设计引物及探针，建立7种常见致病非结核分枝杆菌（NTM）的RNA恒温扩增实时快速检测方法（SAT），评价其体系的灵敏度及特异度；同时采用该鉴定体系初步评估其检测临床分离株和痰标本的应用效果。 方法：分别以鸟、胞内、偶发、蟾蜍、瘰疬分枝杆菌的16S rRNA特异序列，，堪萨斯、海分枝杆菌的23S rRNA特异序列为靶标设计各自的RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物，42℃恒温扩增实时检测7种常见致病NTM。SAT对22种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和259株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测，同时以PCR测序结果为参考对照，分析SAT与PCR测序法检测临床分离株中7种NTM的符合率。SAT和罗氏培养+PCR测序法同时对369份痰标本进行检测，两种检测方法结果不符的样本，重复SAT检测和罗氏培养，分析SAT与罗氏培养+PCR测序检测痰标本中7种NTM的符合率。 结果：SAT能够将鸟、胞内、堪萨斯、偶发、蟾蜍、瘰疬分枝杆菌从22种分枝杆菌和5种非分枝杆菌中鉴定出来，特异度为100%；在鉴定海分枝杆菌时，瘰疬分枝杆菌有弱阳性，阳性样本需再进行瘰疬分枝杆菌检测以排除假阳性。SAT检测其灵敏度分别30CFU/ml、20CFU/ml、30CFU/ml、60CFU/ml、20CFU/ml、240CFU/ml、110CFU/ml。以PCR测序法为参考方法，检测临床分离株中鸟、胞内、堪萨斯、偶发、蟾蜍、瘰疬、海分枝杆菌的符合率分别为100%（259/259）、100%（259/259）、99.61%（258/259）、99.61%（258/259）、100%（259/259）、100%（259/259）、98.07%（254/259）。以罗氏培养+PCR测序为参考方法，检测痰标本中鸟分枝杆菌的符合率为100%（369/369），胞内分枝杆菌的符合率为99.19%（366/369），堪萨斯分枝杆菌的符合率为99.73%（368/369），偶发、蟾蜍、瘰疬、海分枝杆菌的符合率均为100%（369/369）。 结论：SAT鉴定检测鸟、胞内、堪萨斯、偶发、蟾蜍、瘰疬、海分枝杆菌具有较高的灵敏度和特异度，可为7种常见致病NTM快速鉴定提供一种新方法。
[Abstract]:Objective: to design primers and probes to identify the common molecular species of Mycobacterium, and to establish a real-time and rapid method of RNA constant temperature amplification for the detection of 7 common pathogenic non-tuberculous mycobacteria (NTM) by using (SAT), to evaluate the sensitivity and specificity of the system. At the same time, this identification system was used to evaluate the application effect of clinical isolates and sputum specimens. Methods: the 16s rRNA specific sequences of bird, intracellular, incidental, toad, scrofula, Mycobacterium scrofulla and 23s rRNA specific sequences of Mycobacterium kansans and Mycobacterium kansans were used as targets to design their RNA probes and reverse transcription primers with T7 promoter, respectively. 22 standard strains of mycobacterium, 5 non-mycobacteria and 259 clinical isolates of mycobacteria were identified by real-time detection of 7 common pathogenic NTM.SAT strains by 42 鈩

本文编号：2337196