出血热病毒与人蛋白质相互作用的初步研究

发布时间：2019-09-26 07:19

【摘要】：出血热(hemorrhagic fever)是危害人类健康的重要传染病，即流行性出血热，又称肾综合征出血热，是由病毒引起以鼠类为主要传染源的自然疫源性疾病。出血热的病原为病毒，属布尼亚病毒科的一个新属，称为汉坦病毒属。汉坦病毒的核酸为单链、负性RNA型，分大(L)、中(M)、小(S)三个不同片段，分别编码L蛋白、G1和G2蛋白、NP蛋白，其中L蛋白为多聚酶，G1、G2为包膜糖蛋白，NP为核蛋白。众所周知，病原体蛋白质与宿主蛋白质的相互作用是感染性疾病发生的基础，目前国内外已经开展了幽门螺杆菌、疱疹病毒、疟原虫、鼠疫菌、病毒性肝炎、流感病毒等病原体与宿主蛋白质的相互作用网络研究，而未见出血热病毒与宿主蛋白相互作用的报道，并且其致病机制尚不明确，因此开展出血热病毒与宿主细胞蛋白质相互作用网络研究对提高出血热的防治能力具有重要作用。利用酵母双杂交(Y2H)技术筛选人脾cDNA文库中与流行性出血热病毒AMRV H8205毒株的G2相互作用的蛋白质。共筛选到211个猎物，符合阅读框的177个，其回转验证阳率约为85%。与Y.pestis、EBV、HCV、H5N1的筛库数据均有不同程度的重合。核转录因子NF-κB(Nuclear factor-κB)是响应环境变化的一个至关重要的转录因子，是机体中重要的参与免疫调节与炎症反应的信号通路，参与机体的免疫调节、炎症反应、细胞黏附、生长、分化、凋亡等多个生物学过程。Ribosomal proteinS3(RPS3)是NF-kB的一个亚基并直接调节其特定的下游靶基因的转录。在G2蛋白筛库结果中，RPS3共筛到6次，通过外源免疫共沉淀以及GST-PullDown实验证明G2与RPS3存在蛋白质相互作用。GST-Pull Down实验确定G2与RPS3的相互作用结构域为RPS3(42-243aa)。报告基因实验结果表明G2增强NF-κB转录活性，Real-time PCR结果表明G2显著上调NF-κB通路中依赖于RPS3的下游靶基因的mRNA水平。干涉RPS3后，G2对NF-κB转录活性的影响消失，对其下游靶基因的上调作用也消失。同时G2能够增强RPS3与Imp-α/IKKβ的相互作用，促进RPS3的磷酸化和入核。综上所述，，G2能够通过增强IKKβ对RPS3的磷酸化，进而促进RPS3的入核来激活NF-κB信号通路，影响其下游靶基因的表达水平。实验结果提示我们，RPS3在出血热病毒G2蛋白的致病过程中发挥着重要作用，这一发现在分子水平上对流行性出血热的预防和治疗提供了一种新的理论依据和思路。
【学位授予单位】：北京工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R512.8

【参考文献】