类泛素蛋白ISG15对乙型肝炎病毒相关性肝癌细胞Hep3B的生物学行为的影响

发布时间：2019-11-21 19:08

【摘要】：目的:研究乙型肝炎相关性肝癌细胞Hep3B在ISG15蛋白表达被干扰后,其增殖、迁移、侵袭、凋亡、周期的变化。方法:1、将表达shRNA的质粒转染入Hep3B细胞。2、干扰ISG15蛋白表达前后细胞增殖能力的改变情况利用CCK-8检测试剂及酶标仪进行检测。3、干扰ISG15蛋白表达前后细胞侵袭和迁移能力的变化利用Transwell小室及人造基底膜检验。4、干扰ISG15蛋白表达前后细胞凋亡特点和细胞周期的改变的检测通过流式细胞仪完成。结果:1、ISG15蛋白的表达被干扰后,Hep-3B细胞的增殖能力明显地受到抑制(P0.01)。2、干扰ISG15蛋白的表达导致Hep-3B细胞的迁移能力、侵袭能力均显著减弱(P0.01)。3、干扰ISG15蛋白的表达能促进肝癌细胞凋亡(P0.01),而且以早期凋亡为主。4、ISG15蛋白的表达被干扰后,处于S期的Hep-3B细胞比例明显上升,G1期细胞比例降低(P0.01);结合增殖实验的结果,表明细胞发生了S期阻滞。结论:ISG15蛋白与肝癌的发生发展关系密切,它能促进Hep3B细胞的增殖、迁移、侵袭,能抑制Hep3B细胞的凋亡。减少ISG15蛋白的表达可将细胞周期阻滞于S期。
【图文】：

质粒,转染,乙型肝炎病毒,质粒表达

第 3 章结果3.1 Western Blot 检测 shRNA 干扰前后乙型肝炎病毒相关肝细胞癌细胞株 Hep-3B 中 ISG15 蛋白的表达水平转染入 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542、Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-46、Pgpu/GFP/Neo-shNC 质粒后，经过 48h 的孵育，表达相应的 shRNA，干扰 ISG15蛋白的表达。实验结果表明：转入 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542 质粒组 ISG15蛋白表达水平明显降低，而转入 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-46 质粒组蛋白表达水平无明显变化（图 3.1），表明只有 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542 质粒表达的 shRNA 具有明显的干扰效果。此后的细胞功能学实验转染所选用的均为Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542 质粒，其表达的 shRNA 具有显著地干扰 ISG15蛋白表达的能力；转染 Pgpu/GFP/Neo-ISG15-homo-542 质粒的细胞分组命名为shISG15-Hep3B Cell 组或 542 组。

细胞,处理组,统计学意义,蛋白表达

第 3 章结果组与非处理组 Hep3B 的增殖能力的无差别（即差别无统计学意义，P>0.05处理 24h 后，，处理组 Hep3B 的增殖能力与处理组相比，开始逐渐降低，组差异且有统计学意义（P<0.05）。本实验说明，Pgpu-ISG15-542 质粒转染开始产生作用，且干扰 ISG15 蛋白表达能够抑制 Hep-3B 细胞的增殖（表 3.2）。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7;R512.62

【引证文献】