新疆北疆地区蜱种分布及蜱源性病原检测方法的建立

发布时间：2020-02-19 17:53

【摘要】：目的：蜱媒疾病是指由蜱传播的某些种类的病毒、细菌和寄生虫等所引起的一系列疾病，在世界范围内广泛流行。在中国新疆蜱媒疾病是非常普遍的，但近年来对于蜱种的分布及携带相应病原的基因型等方面的信息较少，并且没有一种相对简便的检测方法。本研究通过对新疆北疆部分地区蜱的地理分布和相应病原体的携带，为研究媒介蜱和蜱媒病原体的遗传多态性和进化关系奠定基础。方法：⑴于新疆北疆14个县市19个调查点采集畜牧体表寄生硬蜱，，通过传统形态学分析，结合线粒体16S rDNA基因与COI基因进行综合分析，鉴定所采集的蜱种的种属及其分布特征。⑵采用病原体分离培养和巢式PCR扩增测序技术对上述鉴别获得的所有蜱种进行蜱媒病原体的分离检测，确定病原体基因型，调查蜱媒病原体的携带率。结果：经传统形态学及分子生物学分析，采集获得4711只寄生蜱可归属为2个亚科，4个属，7个种，分别为亚洲璃眼蜱，刻点血蜱，草原革蜱，边缘革蜱，图兰扇头蜱，残缘璃眼蜱和嗜群血蜱。相比于三十年前，随着气温及降水的改变，前五位蜱种成为该区域的优势蜱种。并于部分采集点发现一些新兴蜱种。蜱媒莱姆疏螺旋体于克拉玛依、木垒、裕民、伊宁、察布查尔和石河子-沙湾地区检出，阳性比例分别为18%、6.25%、3.33%、53.5%、86%和6.1%，且从新疆刻点血蜱、亚洲璃眼蜱、图兰扇头蜱和边缘革蜱中分离到莱姆病螺旋体。通过对莱姆疏螺旋体5S-23S rRNA基因间隔区测序分析表明，获得3种伯氏疏螺旋体不同序列，同源性98.6%-99.5%；4种伽式疏螺旋体不同序列，同源性在98.8%-99.6%，并从图兰扇头蜱中首次分离到伯氏疏螺旋体。另外，采用巢式PCR扩增结果可知新疆北疆不同地区、不同蜱种携带埃立克次体、人粒细胞无形体，且携带率较高，提示新疆北疆地区存在两种蜱媒立克次体病的自然疫源地。结论：(1)采集获得的成年蜱4711只，鉴定为2个亚科，4个属，7个种，亚洲璃眼蜱、刻点血蜱成为新疆北疆14个县市的新优势蜱种；(2)首次从新疆北疆地区分离到伯氏疏螺旋体，并证明其分布及携带蜱种发生了扩散；(3)从调查点采集到的蜱种均检测出蜱媒立克次体病，证明新疆北疆可能存在立克次体自然疫源地；(4)优势蜱种的改变、病原分布的扩散和检测的高阳性率，提示随着气候及降雨量等因素的改变，蜱媒疾病的分布及病原类型也发生变化。
【图文】：

硬蜱,哈萨克,新疆褐牛,美利奴羊

多数（约占 95%），包括哈萨克羊、美利奴羊、湖羊和阿勒泰羊；牛群主要为新疆褐牛、赫斯特牛和哈萨克牛；还有少部分马与骆驼分属于哈萨克马与双峰驼。图1-1 采集地点Fig 1-1 Map of the study area.(A): The Xinjiang Uygur Autonomous Region; (B): fourteen survey counties in northern Xinjiang.1.1.2 虫体的采集所有硬蜱在两年里连续收集。2012 年 4~5 月，首先从 10 个县 12 个采集点进行采集；至 2013 年五一期间，针对不同景观地貌，又从 5 个县 7 个点进行调查采集。对所有采集样本包括采集地点地点，宿主，每个动物采集蜱的数量和采集日期进行记录。每点随机抽取畜牧 10~20 头，采集其体表寄生蜱，共获得 4711 只硬蜱，放置于潮湿阴暗处饲养，保持其存活带回实验室。各地区采集蜱的数量及雌雄比见图 1-2。AB

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图 1-2 不同地区蜱虫组成Fig 1-2 The ticks of different areas1.1.3 主要试剂PCR 所用试剂均购自大连宝生物工程有限公司；DNA 提取试剂盒 DNeasy Blood&Tissue kit 购自德国 Qiagen 公司；DNA Marker、质粒小提试剂盒、DNA 回收试剂盒、T4 DNA 连接酶试剂盒均购自北京天根生化科技有限公司；琼脂糖购自 Sigma 公司，其它所用试剂均为分析纯。1.1.4 主要仪器设备微量移液器（德国 eppendorf 公司）；T-GRADIENT PCR（美国 Bio-Rad 公司）；ImagLab Version 3.0 凝胶成像系统（美国 Bio-Rad 公司）；SW-CJ-2F 超净工作台（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；Labofuge 4008 高速冷冻离心机（德国 Heraeu 公司）；-80℃超低温冰箱（美国 Thermo 公司）；TGL-16L 型离心机（上海安亭科学仪器厂）；DYY-6B型电泳仪（北京六一仪器厂）；YXQ-SG46 高压蒸汽灭菌器（上海佳胜实验设备有限公司）；微波炉（日本松下公司）；SHH.W21 电热恒温水浴箱（北京光明医疗仪器厂）；JA2003N 电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；XW-80A 涡旋振荡器（上海精密科学仪器有限公司）；隔水式电热恒温培养箱（HIQ-X100）；解剖显微镜（LEICA
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R53

【参考文献】