液相芯片技术检测耐多药结核分枝杆菌方法研究

发布时间：2017-03-22 15:10

  本文关键词：液相芯片技术检测耐多药结核分枝杆菌方法研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：结核分枝杆菌耐药性的检测在预防和治疗结核病过程中具有十分重要的意义。从我国国情出发,需要建立一种快速有效、成本低廉的耐多药结核分枝杆菌检测方法。本文设计了含有耐药突变基因的质粒,模拟耐药结核杆菌的不同基因突变类型,将液相芯片技术与等位基因特异性引物延伸反应相结合,对耐多药结核分枝杆菌的检测方法进行研究。确定了方法的最佳反应体系,可以同时对多个突变基因进行检测,各基因位点之间不存在信号干扰,最低检测浓度可达1ng/mL;重复性实验表明,对不同基因突变形式检测的变异系数(CV)为6.72%-12.77%。本研究建立的耐多药结核杆菌的检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测速度快、价格低廉、高通量等特点,极具临床应用潜力。
【关键词】：液相芯片技术 等位基因特异性引物延伸反应 结核分枝杆菌 耐多药性
【学位授予单位】：长春理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R52
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第一章 绪论7-18
• 1.1 结核病简介7-10
• 1.1.1 结核病的产生7
• 1.1.2 结核病的基本现状7-8
• 1.1.3 耐药结核病的分类8
• 1.1.4 结核病的主治药物8-9
• 1.1.5 结核杆菌的耐药机理9-10
• 1.2 检测结核病耐药性的常用方法10-14
• 1.2.1 药物敏感性试验法10-11
• 1.2.2 直接测序法11
• 1.2.3 聚合酶链式反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)11-12
• 1.2.4 PCR-线性探针杂交技术12-13
• 1.2.5 固相芯片法13-14
• 1.3 Luminex液相芯片技术14-16
• 1.3.1 Luminex液相芯片技术原理14-15
• 1.3.2 Luminex xTAG技术15-16
• 1.3.3 液相芯片技术的优势及其应用16
• 1.4 本研究实验设计16-18
• 1.4.1 研究目的和意义16-17
• 1.4.2 实验设计17-18
• 第二章 液相芯片技术检测耐多药结核分枝杆菌方法建立18-36
• 2.1 实验材料18-19
• 2.1.1 材料18
• 2.1.2 主要仪器18
• 2.1.3 主要试剂18
• 2.1.4 实验溶液的配制18-19
• 2.2 方法19-27
• 2.2.1 检测序列信息19-20
• 2.2.2 感受态细胞的制备20-21
• 2.2.3 含有检测模板的质粒转化21
• 2.2.4 质粒的提取21-22
• 2.2.5 PCR扩增反应22-23
• 2.2.6 PCR产物纯化23
• 2.2.7 ASPE反应23-24
• 2.2.8 荧光微球杂交24-25
• 2.2.9 Luminex 200仪器校正25-26
• 2.2.10 样品检测26-27
• 2.2.11 反应条件优化27
• 2.3 实验结果27-33
• 2.3.0 质粒含量检测结果27-28
• 2.3.1 PCR扩增及反应体系优化结果28-29
• 2.3.2 PCR扩增产物纯化结果29
• 2.3.3 Tsp DNA聚合酶浓度优化结果29-30
• 2.3.4 荧光微球浓度优化结果30-31
• 2.3.5 链霉亲和素藻红蛋白浓度优化结果31-32
• 2.3.6 链霉亲和素藻红蛋白杂交时间优化结果32-33
• 2.3.7 8种重组质粒的检测结果33
• 2.4 讨论33-35
• 2.5 小结35-36
• 第三章 液相芯片技术检测耐多药结核分枝杆菌可靠性研究36-44
• 3.1 实验材料36-37
• 3.1.1 材料36
• 3.1.2 主要仪器36
• 3.1.3 主要试剂36
• 3.1.4 实验溶液的配制36-37
• 3.2 方法37-38
• 3.2.1 灵敏度实验37
• 3.2.2 重复性实验37-38
• 3.3 结果38-42
• 3.3.1 灵敏度检测38-39
• 3.3.2 重复性检测39-42
• 3.4 讨论42-43
• 3.5 小结43-44
• 结论44-45
• 致谢45-46
• 参考文献46-48

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本文编号：261748