干扰素-γ释放方法评价成人VZV特异性细胞免疫效果

发布时间：2017-03-24 18:07

  本文关键词：干扰素-γ释放方法评价成人VZV特异性细胞免疫效果，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus, VZV)是水痘和带状疱疹的致病病原体,在儿童初次感染引起水痘,恢复后病毒潜伏在体内,少数病人在成人后病毒再激活而引起带状疱疹。目前我国水痘的真实发病率很高,是突发公共卫生事件的主要原因之一。带状疱疹的发生与VZV特异性细胞免疫水平密切相关,当免疫水平下降时,VZV被激活而发生带状疱疹。目前针对水痘和带状疱疹的治疗均无法完全清除体内病毒,而疫苗的接种可以有效的预防这两种疾病。随着水痘疫苗接种人数的增多和带状疱疹疫苗的推广应用,迫切需要建立一种简便、快速、准确的方法评价疫苗的细胞免疫效果,评价成人的VZV特异性CMI,判断其是否为易感人群,是否需接种疫苗预防带状疱疹。目前免疫学中检测VZV特异性细胞免疫应答的方法主要有细胞内细胞因子染色法、皮肤试验、IFN-γ Eli spot和IFN-γ释放试验,前三者分别存在灵敏度低、实验室无法实施和操作繁琐等缺点,而且都不能定量。近年发展的基于ELISA的IFN-γ释放试验正逐渐被认可,已应用于TB/LTB的诊断并且有相关商品化试剂盒批准上市,在HCMV和VZV CMI检测上的应用也有诸多报道。基于以上研究,本论文应用这一新的IFN-γ释放试验评价成人的VZV特异性CMI,考察研究对象接种水痘疫苗后细胞免疫应答水平的变化。在本研究中,我们首先优化IFN-γ释放试验条件,确定了刺激抗原的处理方式、抗原加入量、全血与抗原共孵育的最佳时间、全血稳定性等,确定试验的最佳条件。然后随机选择12名成人作为研究对象,在接种前采集全血用于ELISA试验检测其中IFN-γ释放水平,考察未知人群针对VZV的CMI水平。每人接种水痘减毒活疫苗一支,21天后采集全血检测IFN-γ释放水平,与接种前水平进行比较,观察个体接种疫苗后CMI水平的变化。本研究试验结果发现,(1)刺激抗原的处理方式、抗原加入量、全血与抗原共孵育的最佳时间、全血稳定性等均对干扰素-γ释放有影响,紫外灭活的水痘抗原刺激效果较好,全血与抗原共孵育48h左右较为合适,全血样本应尽快进行孵育试验；(2)12名研究对象接种水痘减毒活疫苗前全血中干扰素-γ释放水平存在差异,接种疫苗后均有不同程度提高,干扰素-γ释放水平几何平均值(GMT)接种前后分别为6.13pg/ml和234.75pg/ml。由于年龄、性别以及身体状况等不同,增长的倍数和数值在个体间均存在较大差异。(3)由于样本量有限,无法进行统计分析,难以确定高危人群干扰素-γ释放水平阂值,接下来将扩大样本量进行研究,确定水痘-带状疱疹易感人群的干扰素-γ释放水平范围,期望应用该法指导带状疱疹临床研究中高危人群的筛选。
【关键词】：水痘带状疱疹病毒 细胞免疫 干扰素-γ释放试验
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R752.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-23
• 1.1 研究背景介绍11-14
• 1.1.1 VZV相关疾病11-12
• 1.1.2 水痘和带状疱疹的发病机制和传播途径12-13
• 1.1.3 水痘和带状疱疹的流行情况13-14
• 1.2 水痘-带状疱疹病毒14-16
• 1.3 水痘和带状疱疹的防治16-18
• 1.3.1 水痘和带状疱疹的预防和治疗16-17
• 1.3.2 水痘疫苗及带状疱疹疫苗17-18
• 1.4 水痘疫苗和带状疱疹疫苗免疫效果评价18-23
• 1.4.1 体液免疫效果评价18-19
• 1.4.2 细胞免疫效果评价19-23
• 本论文研究目的、思路和方法23-24
• 第二章 材料与方法24-32
• 2.1 主要试验材料、仪器设备、耗材24-26
• 2.1.1 材料24
• 2.1.2 主要试剂24
• 2.1.3 主要溶液及其配制24-25
• 2.1.4 主要仪器设备25-26
• 2.1.5 主用耗材26
• 2.2 试验方法26-32
• 2.2.1 VZV刺激抗原的制备26-27
• 2.2.2 新鲜全血的采集27
• 2.2.3 全血与刺激抗原共孵育27
• 2.2.4 hIFN-γ ELISA试验27-28
• 2.2.5 比较不同方式制备的抗原的刺激效果28-29
• 2.2.6 VZV抗原中其他成分对IFN-γ释放的影响29
• 2.2.7 不同孵育时间对IFN-γ释放的影响29-30
• 2.2.8 不同抗原量对IFN-γ释放的影响30
• 2.2.9 全血放置时间对IFN-γ释放的影响30
• 2.2.10 观察个体接种水痘疫苗前后IFN-γ释放水平的变化30-31
• 2.2.11 结果统计和分析31-32
• 第三章 结果与讨论32-40
• 3.1 不同方式制备的抗原的刺激效果比较32
• 3.2 VZV抗原中其他成分对IFN-γ释放的影响32-33
• 3.3 不同孵育时间对IFN-γ释放的影响33-34
• 3.4 不同抗原量对IFN-γ释放的影响34-35
• 3.5 全血稳定性35-36
• 3.6 观察个体接种水痘疫苗前后IFN-γ释放水平的变化36-37
• 3.7 讨论37-40
• 结论40-41
• 参考文献41-46
• 致谢46

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