多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的抗原表位的预测及鉴定

发布时间：2017-03-28 19:10

  本文关键词：多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的抗原表位的预测及鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的预测并鉴定分析多房棘球绦虫抗原蛋白Emy162及TSP3的B细胞和T细胞(Th1型、Th2型、Th17型)优势抗原表位,为后续抗多房棘球蚴多表位疫苗的研制奠定基础。方法1.Genbank获取Emy162、TSP3的氨基酸序列后通过生物信息学软件SOPMA预测二级结构特征,进一步通过在线软件IEDB、SYFPEITHI、Bcepred和ABCpred预测潜在的T细胞和B细胞表位。2.收集Emy162蛋白、TSP3蛋白、PBS分别免疫后的BALB/c小鼠得脾脏淋巴细胞,并用化学合成的抗原小肽进行刺激共培养。通过脾脏淋巴细胞增殖实验、培养上清与病人血清ELISA实验,鉴定出具有良好免疫原性的B细胞抗原表位。3.人工合成的T细胞抗原小肽刺激Emy162蛋白、TSP3蛋白、PBS致敏小鼠脾脏淋巴细胞,通过ELISA、ELISpot、流式细胞术等方法检测Th1、Th2、Th17型细胞因子的表达,鉴定出具有良好免疫原性的Th1、Th2、Th17型细胞抗原表位。结果1.Emy16、TSP3蛋白均存在潜在优势抗原性表位存在。Emy162的8个潜在优势B细胞表位为E7-13、E19-27、E28-36、E37-48、E78-83、E101-109、E112-121、E129-139;Emy162的6个T细胞潜在优势抗原表位为E7-13、E36-41、E80-89、E87-96、E97-106、E129-139。TSP3的7个B细胞潜在优势抗原表位分别为T18-33、T45-55、T53-63、T64-75、T80-90、T92-104、T110-122;TSP3蛋白的8个T细胞表位是T33-42、T45-55、T53-63、T68-77、T80-90、T92-104、T110-122、T134-144。2.Emy162、TSP3蛋白各B抗原表位的抗原性不同。Emy162的3个优势B抗原表位为E19-27、E112-121、E129-139;TSP3的3个优势B抗原表位为T18-33、T45-55、T110-122。3.Emy162蛋白各T抗原表位可诱导不同细胞因子的表达。E7-13、E36-41、E80-89、E129-139为Emy162的Th1型优势抗原表位;E36-41、E87-96、E97-106为Emy162的Th2型优势抗原表位;E36-41、E87-96、E97-106为Emy162的Th17型优势抗原表位。4.TSP3蛋白各T抗原表位可诱生不同细胞因子的表达。TSP3的优势Th1型抗原表位为T33-42、T45-55、T80-90、T110-122;TSP3的Th2型优势抗原表位为T45-55、T68-77、T92-104;TSP3的Th17型优势抗原表位为T53-60、T80-90。结论1.Emy162及TSP3具有良好的抗原性,并存在潜在优势抗原表位。利用生物信息学的方法预测分析出了Emy162的8个B细胞表位和6个T细胞表位,预测分析出TSP3蛋白8个T细胞和7个B细胞表位。2.Emy162蛋白具有3个优势B细胞表位、4个Th1型优势抗原表位、3个Th2型优势抗原表位、3个Th17型优势抗原表位。3.TSP3蛋白具有3个优势B细胞表位、4个Th1型优势抗原表位、3个Th2型优势抗原表位、2个Th17型优势抗原表位。4.鉴定出的各优势抗原表位,为后续研制用于免疫预防接种、诊断、治疗的高效多表位疫苗奠定了理论基础。
【关键词】：多房棘球蚴 生物信息学 抗原表位 B细胞表位 T细胞表位
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R532.32
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要符号对照表10-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的免疫优势表位的预测14-30
• 2.1 材料与方法14-15
• 2.1.1 获取Emy162及TSP3蛋白的氨基酸序列14
• 2.1.2 Emy162及TSP3蛋白质的二级结构特征预测14
• 2.1.3 预测Emy162及TSP3抗原蛋白的T细胞抗原表位14-15
• 2.1.4 预测Emy162及TSP3蛋白的B细胞抗原表位15
• 2.2 结果15-26
• 2.2.1 获取Emy162及TSP3蛋白的氨基酸序列15-16
• 2.2.2 预测的Emy162及TSP3蛋白质二级结构16-17
• 2.2.3 预测所得Emy162及TSP3蛋白的T细胞抗原表位17-21
• 2.2.4 预测所得Emy162及TSP3抗原的B细胞表位21-26
• 2.3 讨论26-28
• 2.4 结论28-30
• 第3章 多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的B细胞免疫优势表位的鉴定30-40
• 3.1 材料与方法30-33
• 3.1.1 材料30-32
• 3.1.1.1 抗原的获得30
• 3.1.1.2 实验动物30
• 3.1.1.3 实验仪器30-31
• 3.1.1.4 实验动物及试剂31
• 3.1.1.5 试剂配制31-32
• 3.1.2 方法32-33
• 3.1.2.1 小鼠的免疫32
• 3.1.2.2 小鼠脾脏淋巴细胞的分离[50]32
• 3.1.2.3 小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验32-33
• 3.1.2.4 抗原小肽与病人血清ELISA反应33
• 3.2 结果33-36
• 3.2.1 Emy162的B细胞抗原小肽刺激后淋巴细胞增殖反应的检测33-34
• 3.2.2 TSP3的B细胞抗原小肽刺激后淋巴细胞增殖反应的检测34-35
• 3.2.3 Emy162的B细胞抗原小肽与病人血清ELISA反应的检测35-36
• 3.2.4 TSP3的B细胞抗原小肽与病人血清ELISA反应的检测36
• 3.3 讨论36-38
• 3.4 结论38-40
• 第4章 多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的T细胞免疫优势表位的鉴定40-57
• 4.1 材料与方法40-45
• 4.1.1 材料40-42
• 4.1.1.1 实验仪器40
• 4.1.1.2 实验动物40
• 4.1.1.3 免疫物40-41
• 4.1.1.4 实验试剂41
• 4.1.1.5 试剂配制41-42
• 4.1.2 方法42-45
• 4.1.2.1 小鼠的免疫42
• 4.1.2.2 小鼠脾脏淋巴细胞的分离42-43
• 4.1.2.3 小鼠脾脏淋巴细胞的培养43
• 4.1.2.4 小鼠脾脏淋巴细胞因子ELISA检测43-44
• 4.1.2.5 小鼠脾脏淋巴细胞因子ELISpot检测44
• 4.1.2.6 小鼠脾脏淋巴细胞因子流式细胞术检测44-45
• 4.2 结果45-53
• 4.2.1 Emy162的优势T抗原表位鉴定45-49
• 4.2.1.1 不同细胞因子ELISA检测筛选T表位45-47
• 4.2.1.2 不同细胞因子ELISpot检测筛选T表位47-48
• 4.2.1.3 流式细胞术对优势抗原表位的验证48-49
• 4.2.2 TSP3的优势T抗原表位鉴定49-53
• 4.2.2.1 不同细胞因子ELISA检测鉴定T表位49-50
• 4.2.2.2 不同细胞因子ELISpot检测筛选T表位50-52
• 4.2.2.3 流式细胞术对优势抗原表位的验证52-53
• 4.3 讨论53-55
• 4.4 结论55-57
• 参考文献57-64
• 全文总结64-66
• 创新点66-67
• 不足和展望67-68
• 致谢68-69
• 综述69-83
• 参考文献77-83
• 个人简历83-84

【参考文献】

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本文编号：272854