乙肝相关性慢加急性肝衰竭血清代谢组学分析及其动态变化的研究

发布时间：2020-07-08 17:08

【摘要】：研究目的:通过对乙肝相关性慢加急性肝衰竭血清代谢轮廓进行横断面及动态变化的研究,寻找有助于该疾病早期诊断、病情监测及预后判断的潜在生物标志物,揭示乙肝相关性慢加急性肝衰竭发生发展过程中的物质变化规律,为探索乙肝相关性慢加急性肝衰竭的发病机制奠定基础。同时近期越来越多的证据表明,自分泌运动因子-溶血磷脂酸轴(ATX-LPA)在肝脏疾病中发挥重要的生物学功能。而ATX-LPA生物轴在乙肝相关性慢加急性肝衰竭中的生物学功能尚未见报道,本研究旨在检测乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者血清自分泌运动因子(autotaxin,ATX)水平的变化,探讨血清ATX作为乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者生物学标志物的临床应用价值。研究方法:采用UPLC-LTQ Orbitrap XL超高效液相色谱与质谱联用系统对28例乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者血清样本进行动态追踪检测,并对照35例乙肝肝硬化Child pugh A级患者、30例慢性乙型肝炎患者以及35例健康志愿者的血清标本的代谢轮廓,建立疾病区分模型及病程追踪模型,筛选出慢加急性肝衰竭患者组血清代谢谱变化的特征离子,同时对筛选出的特征离子进行物质鉴定,进而根据病程进展的不同趋势分析这些代谢物质所具有的预后判断及病程监测的潜在临床应用价值。另选择50例乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者、11例乙肝相关性慢加急性肝衰竭前期患者、39例乙肝肝硬化Child pugh A级患者、26例慢乙肝患者以及38例健康者,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对血清ATX水平进行检测。研究结果:乙肝相关性慢加急性肝衰竭和乙肝肝硬化Child pugh A级患者、慢性乙型肝炎患者及健康志愿者血清代谢物谱明显不同,建立了正交偏最小二乘(OPLS-DA)模型,共筛选出99个特征代谢离子,并鉴定出其中38种物质,其在乙肝相关性慢加急性肝衰竭组血清中相对含量相比乙肝肝硬化Child pugh A级组均存在显著差异。对乙肝相关性慢加急性肝衰竭血清代谢轮廓动态追踪研究发现,上述99种物质中,17种物质(Lyso PC(18:0),L-苏氨酸,DHAP(18:0),Lyso PC(17:0),m/z=210.05,乙酰乙酸,PA(20:4(5Z,8Z,11Z,14Z)e/2:0,Lyso PC(15:0),Lyso PC(16:0),m/z=258.818,Lyso PC(14:0),Phenylalanyl Phenylalanine,m/z=475.172,葡糖醛酸胆红素,m/z=797.3,m/z=599.29及m/z=775.318)与乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者预后相关,其在乙肝相关性慢加急性肝衰竭好转组和死亡组间存在显著差异;11种物质(Lyso PC(14:0),Phenylalanyl Phenylalanine,m/z=775.318,m/z=475.172,葡糖醛酸胆红素,m/z=797.3,m/z=599.29,Lyso PC(22:5),m/z=759.286,m/z=515.313和m/z=809.287)具有病情监测价值,其在乙肝相关性慢加急性肝衰竭好转组中随病情好转呈现显著变化趋势。同时在乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者及乙肝相关性慢加急性肝衰竭前期患者血清中ATX水平显著高于乙肝肝硬化Child pugh A级患者、慢性乙型肝炎患者及健康志愿者,但乙肝相关性慢加急性肝衰竭前期患者血清中ATX水平低于乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者,进展至肝衰竭的肝衰竭前期患者血清ATX显著高于没有进展至肝衰竭的患者。伴有自发性细菌性腹膜炎和/或肺炎的男性乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者血清ATX显著高于不伴感染的乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者。血清ATX水平与ALB,ALT AST,ALP,TBIL,TBA,INR及MELD评分等肝功能指标具有显著的相关性。研究结论:通过对乙肝相关性慢加急性肝衰竭的血清代谢物谱分析,代谢组学为疾病的诊断提供了新的方法,同时对乙肝相关性慢加急性肝衰竭血清代谢轮廓的动态追踪研究,鉴定了具有预后判断及病情监测价值的标志物,部分揭示了乙肝相关性慢加急性肝衰竭的发病机制。在乙肝相关性慢加急性肝衰竭患者、肝衰竭前期患者血清中ATX水平显著升高,提示血清ATX可能成为乙肝相关性慢加急性肝衰竭早期预警指标。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62;R575.3
【图文】：

性乙型肝炎患者（H）及健康对照(N)血清样本的总离子流图1.2.2 质量控制通过质控溶液在整个样品分析过程中的表现，可以很好的评估UPLC-MS 系统的稳定性,对 30 个质控样品所得到数据进行主成分分析（PCA）后，得到拥有主成分是 2 个的 PCA 模型（R2X=40.6%,Q2=22%），如图 2，通过对前 8 个质控样本的分析系统逐渐达到稳定平衡状态，分析此后 22 个质控样品在 PCA 模型分布中可以看出，对整个样品检测分析的过程中系统比较平稳，而且在整个质控过程并没有界外值的出现，故参考关于 UPLC-MS 平台稳定性的相关文献提出质控合格的标准认为本批样本分析结果可靠。

图 2 质控溶液 PCA 模型第一主成分(t[1])打分线性图1.2.3 慢加急性肝衰竭血清代谢模型建立利用所有 28 例慢加急性肝衰竭患者（包括好转与死亡组）入院首次取血标本与乙肝肝硬化 Child pugh A 级组（35 例）、慢性乙型肝炎组（30 例）以及健康对照组（35例）构建主成分分析(PCA)模型（如图3.1所示），模型参数R2X=76.9%，Q2=65.3%，PCA模型已经显示出慢加急性肝衰竭患者与乙肝肝硬化Child pugh A级组、慢性乙型肝炎组以及健康对照组代谢谱存在显著差别。

利用所有 28 例慢加急性肝衰竭患者（包括好转与死亡组）入院首次取血标本与乙肝肝硬化 Child pugh A 级组（35 例）、慢性乙型肝炎组（30 例）以及健康对照组（35例）构建主成分分析(PCA)模型（如图3.1所示），模型参数R2X=76.9%，Q2=65.3%，PCA模型已经显示出慢加急性肝衰竭患者与乙肝肝硬化Child pugh A级组、慢性乙型肝炎组以及健康对照组代谢谱存在显著差别。

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本文编号：2746811