HIV派生的MicroRNA99致巨噬细胞焦亡及机制的研究

发布时间：2020-07-25 15:24

【摘要】：目的:探讨HIV派生的MicroRNA99(miRNA99)对巨噬细胞焦亡的影响及机制。方法:用佛波酯(PMA)刺激人单核白血病细胞(THP-1),使其分化为巨噬细胞,光镜下观察细胞的形态,用流式测定细胞表面CD11b,鉴定细胞;将鉴定好的巨噬细胞进行分组,分为PBS组(空白对照)、LPS+ATP组(阳性对照)、miRNA99组(实验组);采用Leyovc将miRNA99 mimics瞬时转染至巨噬细胞,共培养24H后,采用Western Blot方法测定活化caspase-1蛋白水平;采用ELISA测定细胞上清中IL-18、IL-1β的含量;将巨噬细胞细胞又分为2组,miRNA99+TLR8RNAi质粒组、miRNA99+空质粒组,转染细胞,在共聚焦下查看细胞内荧光;采用Western Blot方法检测TLR8蛋白及活化caspase-1蛋白水平;用ELISA法测定TLR8沉默之后细胞上清中IL-18、IL-1β的含量。结果:1.经PMA刺激24小时后细胞贴壁生长,伸出伪足,表面CD11b阳性率在99%以上;2.LPS+ATP组与miRNA99组活化caspase-1蛋白水平、上清液中IL-18、IL-1β的含量明显高于对照组(P0.05),差异有统计学意义;3.转染TLR8 RNAi质粒后巨噬细胞内呈现绿色荧光,Western Blot示实验组TLR8蛋白表达明显减少。在TLR8质粒+miRNA99组,活化caspase-1蛋白水平及上清液中IL-18、IL-1β的含量明显低于空质粒+miRNA99组,(P0.05),差异有统计学意义。结论:1.HIV来源的miRNA99可以诱导巨噬细胞发生焦亡2.miRNA99诱导焦亡的机制有TLR8途径的参与3.HIV派生的miRNA99通过细胞焦亡机制使机体产生慢性免疫激活状态
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R512.91
【图文】：

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山西医科大学硕士学位论文2.2 细胞表面表达 CD11b 的情况流式细胞术显示，经 PMA 刺激 24 小时后，CD11b 在细胞表面的表达率大于99%,这提示了 THP-1 细胞已经大部分成功分化成为巨噬细胞，巨噬细胞模型构建成功，能在后期实验中使用。（图 2A，2B,2C）图 2 细胞表面表达 CD11b 的情况Fig.2 The positive rate of CD11b on THP-1 cell surface

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【参考文献】