细粒棘球蚴经MAPK-Nrf2通路调节抗氧化酶的表达

发布时间：2020-08-25 21:40

【摘要】：目的:目前研究证实MAPK能够增加Nrf2的核积聚,并进一步促进其下游靶基因的转录。但这种上下游的分子机制还未在细粒棘球蚴中证实。本实验以体外培养的细粒棘球蚴原头节为研究对象,探讨细粒棘球蚴原头节内MAPK对Nrf2信号通路及其下游抗氧化酶表达的影响。方法:相对无菌环境下抽取细粒棘球蚴原头节,培养基培养3天后按具体实验步骤分为以下各组:1.空白及丙泊酚模型对照组;2.0.5mM H_2O_2组;3.丙泊酚(0.5mM、0.75mM、1mM)预处理8h后加入0.5mM H_2O_2组;4.0.1mM ERK抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125、P38抑制剂SB202190分别预处理2h后+1mM丙泊酚共培养8h,最后加入0.5mM H_2O_2培养6h组。药物处理后,用伊红染液对原头节进行染色,普通光学显微镜下观察原头节染色情况,记录3次实验结果并绘制活力曲线图。使用酶联免疫吸附实验测定药物作用后原头节内ROS水平及HO-1酶活性。蛋白免疫印记法(Western-blot)检测原头节内Nrf2及HO-1蛋白表达量。结果:空白组及丙泊酚模型对照组原头节活力无明显变化。单独使用0.5mM H_2O_2培养6h原头节的活力为38%。丙泊酚(0.5、0.75、1mM)处理原头节8h后,在新鲜的培养基中再加入0.5mM H_2O_2共培养6h。0.5 mM、0.75 mM和1 mM丙泊酚组对应原头节存活率分别为48%,58%和65.5%。分别使用PD98059、SB202190、SP600125预处理原头节2h,然后使用1mM的丙泊酚培养8h,最后加入H_2O_2共培养6h。原头节活力分别为61%,36%,34%。与对照组相比原头节活力明显下降差异具有统计学意义(P0.05)。使用荧光显微镜下观察以下六组原头节内ROS的含量:与对照组相比H_2O_2及三种MAPK抑制剂明显增加原头节内ROS含量,丙泊酚可以抑制原头节内ROS的产生(P0.05)。HO-1试剂盒发现H_2O_2和丙泊酚提高HO-1酶活性,三种MAPK抑制剂均有不同程度的抑制作用,抑制p38及JNK信号通路对HO-1酶活性影响更大。Western-blot结果表明与对照组相比丙泊酚加H_2O_2组增加Nrf2及HO-1蛋白的表达,加入JNK、p38抑制剂后Nrf2及HO-1蛋白表达的作用被明显抑制,ERK抑制剂抑制Nrf2及HO-1蛋白表达的作用较前两者弱。结论:1.H_2O_2及MAPK抑制剂可抑制原头节的活力,诱导原头节内ROS的产生。2.H_2O_2及丙泊酚促进原头节中Nrf2与HO-1的表达,使用MAPK抑制剂后Nrf2及HO-1的表达明显下降。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R532.32
【图文】：

曲线,原头节,丙泊酚,生长活力

酚及 MAPK 抑制剂对原头节活力的影响下观察并记录不同实验药物作用后原头节的存活处理后绘制活力曲线。首先通过实验观察丙泊酚别使用 0.25、0.5、0.75、1mM 的丙泊酚培养原活力均大于 95%，原头节活力无明显差异。从而（图 1a）。单独使用 0.5mM H2O2培养 6h 原头 H2O2诱导原头节凋亡的影响，用丙泊酚（0.5、新鲜的培养基中再加入 0.5mM H2O2共培养 6h。应原头节存活率分别为 48%, 58%和 65.5%（图计学意义（P<0.05）。为了探究 MAPK 与 Nrf2的作用，我们使用 H2O2作为细胞凋亡诱导物。用 PD98059、SB202190、SP600125 预处理原头h，最后加入 H2O2共培养 6h。使用 0.1%的伊红染（图 2）。MAPK 抑制剂组与对照组之间原头节）。综上所述丙泊酚可以抑制 H2O2诱导原头节的节的凋亡。

曲线,原头节,生长活力,抑制剂

图 2 ERK、p38、JNK 抑制剂体外作用后原头节生长活力曲iability of protoscoleces incubated in vitro with inhibitors of Eb：0.5mM H2O2处理细粒棘球蚴原头节 6h；c: 1mM 丙泊酚培养细粒棘球蚴原头节 6h；d,e,f : 分别使用 ERK 抑制抑制剂 SP600125 预处理原头节 2h，然后加入 1mM 丙泊头节 6h。酚和 MAPK 抑制剂对体外原头节内 ROS 的2、丙泊酚、MAPK 抑制剂对体外原头节内 ROS 的CFH-DA 探针孵育 1h，荧光显微镜下观察原头节内示 H2O2及 MAPK 抑制剂明显增加 ROS 的生成。丙产生，但是这种现象可被 MAPK 抑制剂阻断。差 b

原头节,药物作用,丙泊酚,细粒棘球蚴

15图 3 实验药物作用后原头节内 ROS 的变化 3. ROS fluorescence intensity of protoscoleces after incubated with Experimental对照组；b: 1mM 丙泊酚预处理原头节 8h 后加入 0.5mM H2O2培养细粒棘球蚴M H2O2处理细粒棘球蚴原头节 6h；d,e,f : 分别使用 ERK 抑制 PD98059，90，JNK 抑制剂 SP600125 预处理原头节 2h，然后加入 1mM 丙泊酚培养原头O2孵育原头节 6h。*与空白组比较（P<0.05）。PK 信号通路抑制原头节内 Nrf2 及其下游 HO-1 的表达。了初步探讨 MAPK 信号通路参与 Nrf2 及 HO-1 表达的分子机制，，使用 western-blot 检测 Nrf2 及 HO-1 蛋白的表达量，Elisa 检测 Hestern-blot 与 Elisa 两种实验方法得出的结果趋势大体一致如图 4 所白对照组相比丙泊酚明显增加 Nrf2 及 HO-1 蛋白的表达，与加入比 H2O2组 Nrf2 及 HO-1 蛋白表达增加，加入 P38 及 JNK 抑制剂进 Nrf2 及 HO-1 蛋白表达的作用被明显抑制，加入 ERK 组 Nrf2 及微抑制。因此得出结论，细粒棘球蚴原头节经MAPK信号通路参与N

【参考文献】