ARFP在HCV感染慢性化中的作用及与TBX21基因多态性关系的研究

发布时间：2017-04-01 11:14

  本文关键词：ARFP在HCV感染慢性化中的作用及与TBX21基因多态性关系的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起慢性肝炎的主要病原体之一,HCV感染极易慢性化,其慢性化率可达75%-85%,约20%的感染者将进展为肝纤维化,甚至肝癌等终末期肝病。HCV感染所引起的丙型肝炎呈全球分布,据WHO统计,目前全世界HCV感染者约有1.8亿人,严重威胁着人类的健康。目前,关于HCV感染慢性化的机制尚未完全阐明。对HCV核心基因密码子移位产生的转框蛋白(alternative reading frame protein,ARFP)的研究表明,ARFP能够引起细胞内NF-κB的持续激活,从而增强细胞抵抗TNF-α诱导凋亡的能力,抑制细胞凋亡,是HCV在细胞内建立持久感染的机制之一。此外,ARFP也可像核心蛋白(Core蛋白)一样,发挥干扰细胞周期,调节细胞增殖、凋亡,诱导免疫应答的作用。我们的研究发现,ARFP抗体阳性率与疾病进程相关,在不同临床类型丙型肝炎患者中,中重度和肝硬化患者ARFP抗体阳性率高于急性丙肝组。另外,ARFP还可能通过调节细胞免疫参与HCV感染的进程和转归。本实验室前期研究结果显示,ARFP阳性HCV患者与ARFP抗体阴性HCV患者相比,血清中γ-干扰素(gamma interferon,IFN-γ),白细胞介素-2,4,5,10(interluekin,IL-2,il-4,il-5andil-10)水平呈明显差异,在体外培养的外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,pbmc)中,arfp有上调il-4、il-5和下调ifn-γ水平的作用,提示在hcv感染者中,arfp可能通过影响th1/th2平衡,减少细胞损伤,以利于病毒细胞内寄生,导致病毒持续感染。t-bet是促进th0细胞分化和调控th1/th2细胞亚群及细胞因子平衡的关键转录因子,arfp可能通过影响该转录因子的表达而参与hcv感染的慢性化进展,因此,相关研究具有重要意义。t-bet是由tbx21基因编码的,有研究表明,该基因t-1993crs4794063)位点变异影响tbx21基因的转录活性,另还有多个snp位点与多种疾病有关,如t-1514c(rs17250932)、g-1499a(rs2074190)位点snp与hbv具有相关性,t-1993crs4794063位点变异还和自身免疫性肝炎,il-4和tnf-α的表达量有关,但该基因位点变异与hcv疾病进程的相关性,未见相关报道。为了探讨arfp参与th1/th2漂移的分子机制,本课题组构建了hcv1b型arfp基因的重组质粒pcoldii-f,经过镍离子亲和层析纯化后得到高纯度的arfp。收集慢性hcv1b型患者(chronichepatitispatient,chp)的血样,elisa定性检测arfp抗体,并依据检测结果分成2组[f-ab(+)chp、f-ab(-)chp],收集健康者血样作为对照组。用westernblotting法检测f-ab(+)chp组、f-ab(-)chp组和健康对照组的pbmc中t-bet的表达水平,并用不同浓度的arfp体外刺激pbmc,逆转录-聚合酶链反应(rt-pcr)法检测细胞中stat1和stat6的表达水平,westernblotting法检测磷酸化的stat1/6水平。结果表明,f-ab(+)chp组t-bet表达水平低于f-ab(-)chp组,stat1/6表达水平并不受arfp刺激的影响,然而,arfp可影响pbmc中stat1/6的磷酸化水平。本研究还通过分子流行病学研究方法,对江苏省句容市和镇江市的有偿献血人群进行调查,收集747名慢性hcv患者[190名f-ab(-),557名f-ab(+)]和354名健康对照,用改进的多重高温连接酶检测反应(improvedmultipleligasedetectionreaction,imldr)基因分型技术检测tbx21(编码t-bet转录因子)基因三个位点(rs17250932,rs2074190,rs4794067)等位基因的分布频率,采用病例-对照、病例-病例研究设计,分析了中国汉族人群TBX21基因多态性与HCV慢性化进程及ARFP产生的关系。结果表明rs4794067 C等位基因在CHP患者中的分布频率明显高于健康对照者,特别是在F-Ab(+)组。分层分析后发现,在HCV 1b基因型亚组和轻度肝纤维化亚组中,rs4794067 C等位基因携带者,和HCV Non-1b基因型亚组中rs2074190 G等位基因携带者,他们在HCV感染进程中,具有更高的ARFP产生风险。而在年轻的女性患者中,rs4794067 C等位基因携带者的慢性化进程的风险更高。本研究提示,TBX21的基因多态性与中国汉族高危人群的HCV感染的慢性化进程和ARFP产生显著相关。本研究综合评价HCV的生物学因素(病毒基因变异)、宿主免疫因素(Th1/Th2平衡)、遗传背景(TBX21基因多态性)和环境因素在HCV感染慢性化进程中的作用及其相互关系,初步探讨HCV ARFP参与Th1/Th2漂移的机制以及宿主因素与ARFP产生的关系,为深入研究病毒性肝炎慢性化的机制提供理论基础,对于探索HCV治疗方法具有一定意义。
【关键词】：丙型肝炎病毒 ARFP Th1/Th2 T-bet 基因多态性
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.63
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-16
• 第一部分 HCV1b型ARFP的原核表达和纯化16-24
• 前言16-17
• 材料与方法17-19
• 实验方法19-21
• 结果21-22
• 讨论22-24
• 第二部分 HCV ARFP及T-bet与HCV慢性化机制的研究24-43
• 前言24-25
• 材料与方法25-27
• 实验方法27-33
• 结果33-39
• 讨论39-43
• 第三部分 中国汉族高风险人群TBX21基因多态性与HCV感染转归和ARFP产生的关联研究43-61
• 前言43-44
• 材料与方法44-49
• 研究对象49-51
• 结果51-58
• 讨论58-61
• 参考文献61-72
• 小结72-74
• 综述74-89
• 参考文献80-89
• 附录一 符号及缩略语说明89-91
• 附录二 攻读学位期间发表论文情况91-93
• 致谢93

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2 曾爱萍;常洁;刘芳;邱蔚蔚;;丙型肝炎病毒感染慢性化进程影响因素观察[J];江苏医药;2007年06期

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本文编号：280531