结核病患儿T细胞亚群特征研究和基于流式细胞技术儿童结核病诊断方法的建立

发布时间：2017-04-07 23:12

  本文关键词：结核病患儿T细胞亚群特征研究和基于流式细胞技术儿童结核病诊断方法的建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：儿童结核病长期处于被忽视的状态,近年来引起越来越多的关注,但关于结核病患儿的免疫状态的报道仍非常有限。本文基于多色复杂流式技术,首先系统研究了结核病患儿的T细胞亚群特征。本文结果显示在大于等于5岁组,结核病患儿与健康儿童相比,T细胞总数、α β T、vδ2+T γδT、粘膜相关恒定T细胞(MAIT)、CD4+辅助T细胞(Th)、CD8+T、CD4/CD8双阴性α β T细胞(DNT)、CD4/CD8双阳性α βT细胞(DPT)数量显著降低；CD4+ Th、CD8+T和调节性T细胞(Treg)的中心记忆T细胞(TCM)的百分率显著降低,Th和Treg中的效应记忆T细胞(TEM)百分率显著升高。在小于5岁组,结核病患儿只有v δ2+γ δ T和DNT的细胞数量和Treg的TCM百分率,显著低于健康儿童；Treg中的TEM百分率显著高于健康儿童,其它差异均不显著。以上结果揭示了结核病患儿,特别是大于等于5岁组结核病患儿T细胞亚群发生了广泛的变化,这为今后儿童结核病T细胞的进一步研究提供了重要基础。本文建立了基于流式细胞技术的儿童结核病流式细胞诊断方法(FC法)。结核特异性抗原ESAT-6或CFP10刺激后,如果IFN-γ、TNF-α双阳性或IFN-γ、IL-2双阳性结核抗原特异性T细胞比例高于0.005%,则诊断为结核病。与T-SPOT. TB方法相比,FC法的敏感性为78.6%,高于T-SPOT. TB的敏感性(71.4%)；FC法和T-SPOT. TB的特异性皆为100%。T-SPOT. TB在小于5岁组的敏感性高于大于等于5岁组,而FC法不受年龄的影响。特别值得关注的是,FC法在肺结核(PTB)和肺结核合并肺外结核(PTB+EPTB)患儿中的敏感性为100%,而TSPOT在PTB和PTB+EPTB的敏感性分别为81.8%和88.9%,这说明FC法是一个很有前途的儿童结核病——特别是儿童肺结核的诊断方法。
【关键词】：儿童结核病 T细胞亚群 流式细胞术 T细胞应答 细胞因子 生物标志物
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R529.9
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 缩写表9-17
• 第一章 研究综述17-29
• 第一节 结核病概述17-21
• 1.1.1 结核病的特点17-18
• 1.1.2 结核病的发展和现状18
• 1.1.3 T细胞免疫应答在结核病免疫中所起的作用18-21
• 第二节 儿童结核病21-25
• 1.2.1 儿童结核病的特点及研究现状21-22
• 1.2.2 儿童结核病中T细胞作用的研究现状22-24
• 1.2.3 儿童结核病T细胞免疫特征在结核病诊断中的应用24-25
• 第三节 本论文的研究目的与研究方法25-29
• 1.3.1 本论文的研究目的25-26
• 1.3.2 本文的主要研究流程26-27
• 1.3.3 本论文的研究方法27-29
• 第二章 儿童结核病的T细胞免疫特征研究29-42
• 第一节 材料与方法29-32
• 2.1.1 研究对象29
• 2.1.2 实验试剂和耗材29-30
• 2.1.3 溶液配置30-31
• 2.1.4 主要仪器31
• 2.1.5 方法31-32
• 2.1.6. 数据的获取和分析32
• 2.1.7 数据分析32
• 第二节 结果32-38
• 2.2.1 实验对象分析32
• 2.2.2 T细胞表型流式细胞分析方法的建立32-33
• 2.2.3 各类T细胞数量在结核病组和健康对照组之间的差异33-38
• 2.2.4 αβT细胞各亚群在结核病组和健康对照组之间的差异38
• 2.2.5 αβT细胞各分化亚群的组间比较38
• 第三节 讨论与结论38-42
• 第三章 基于结核特异性T细胞应答的流式细胞技术在儿童结核病诊断中的应用42-53
• 第一节 研究综述42
• 第二节 材料与方法42-46
• 3.2.1 材料42-43
• 3.2.2 方法43-45
• 3.2.3 T-SPOT.TB检测方法45-46
• 3.2.4 数据分析46
• 第三节 结果46-53
• 3.3.1 实验对象分析46-47
• 3.3.2 抗原特异性T细胞用于儿童结核病诊断方法的建立47-49
• 3.3.3 FC法和Tspot法的一致性分析49-50
• 3.3.4 FC法和Tspot用于结核病诊断的具体分析50-51
• 第四节 讨论与结论51-53
• 第四章 结果与展望53-55
• 第一节 结果53
• 4.1.1 儿童结核的T细胞免疫特征研究53
• 4.1.2 基于结核特异性T细胞应答的流式细胞技术在儿童结核病诊断中的应用53
• 第二节 不足与展望53-55
• 参考文献55-63
• 致谢63-64

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