高复制性阿德福韦酯耐药/缺失变异HBV株的克隆及部分生物学特性分析

发布时间：2020-12-15 04:34

　　世界上超过3.5亿的人口感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV), HBV感染仍然是全球的健康问题。慢性乙型肝炎病毒持续感染可能会演变为肝硬化和肝癌,每年死于HBV感染相关的肝衰竭、肝细胞癌达百万。故临床治疗仍然是很大的挑战。核苷(酸)类似物类抗病毒药物的出现及广泛应用,对长期抑制病毒、延缓疾病进展、减少并发症的发生起到了关键性的作用。该类药物主要作用于HBV的聚合酶RT区而发挥抗病毒作用,显著抑制HBV的复制、改善肝功能和组织学损伤。但要巩固疗效需长期维持治疗。长期治疗势必诱导乙肝病毒耐药株的产生,引起临床治疗失败。乙型肝炎病毒为逆转录病毒,逆转录过程中因逆转酶无校对功能,造成基因突变高发。在药物选择压力下,HBV耐药株更易成为优势株。因此,一旦临床治疗过程中出现病毒学突破等治疗失败的情况,均应进一步分析其耐药情况。体外表达质粒研究HBV复制特性及药物敏感性,对特殊耐药株的深入研究尤为重要,可将临床分离株的在体外得以真实表达,指导临床合理治疗、评价药物疗效。对临床耐药HBV毒株的研究需构建能反映感染者体内HBV株生物学功能的体外表达克隆。为此,我们开展了以下工... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

包含1.1拷贝HBV基因组的重组质粒构建流程图

高复制性阿德福韦酷耐药/缺失变异HBV株的克隆及部分生物学特性分析 第一部分2. 6个克隆HBV全基因测序及结果分析2.1.全长结构分析分别对构建成功的6个HBV全基因克隆进行HBV全长测序，测序结果经与野生株序列比对,发现6个克隆的HBV序列均于PreSl/Spacer区段存在巨大缺失区，缺失达207个碱基。该缺失未造成其他各个开放读码框架序列的移位。同时测序证实该临床株的逆转录酶区存在阿德福韦醋相关的耐药位点rtA181T和或rtN236T，与该患者接受拉米夫定、阿德福韦酷序贯治疗后出现病毒学突破的临床特征相符。测序所见该临床株结构及序列缺失段如图14所示。207bp16001900

连接至同样BspQffll切处理的载体PHY106，构建含1.1拷贝HBV基因组的具有体外复制能力的重组质粒。如图1-7所示，构建过程中需判定是否成功将HBV插入预定载体。图为酶切鉴定电泳图，正确构建的质粒经Sac I和Hindlll酶切后应为2.9kb及4.0kb两个条带。可据此蹄选出成功构建的重组质粒。


本文编号：2917668