噬菌体展示技术筛选结核分枝杆菌PPE17蛋白的特异性结合肽

发布时间：2020-12-15 07:14

　　目的运用噬菌体展示技术,对结核分枝杆菌PPE17蛋白特异性结合肽进行了初步筛选。方法从结核分枝杆菌基因组中扩增PPE17基因,克隆到pET28a中,在大肠杆菌BL21中表达,Ni²⁺柱纯化,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定。将纯化的PPE17蛋白包被到ELISA板中,用噬菌体7肽库进行筛选,经4轮淘选后,随机选取噬菌斑进行测序,并用DNAMAN对阳性克隆所编码的多肽氨基酸序列进行分析比较。结果成功构建并表达了PPE17抗原,获得分子量约为37kD的可溶性蛋白。从第4轮的洗脱物中,随机挑选20个噬菌斑。测序结果可翻译成8种多肽分子,其中重复6次的多肽序列为LKWGHVY。结论通过噬菌体展示技术筛选到PPE17蛋白的特异性结合肽,有望成为鉴定该抗原的小分子诊断制剂。 

【文章来源】：公共卫生与预防医学. 2020年05期

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

PPE17的克隆扩增(M:Marker)

PPE17基因链接到质粒pET28a中后,转化到大肠杆菌BL2l中表达,经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE电泳,发现在37kDa处有一条纯化带,与PPE17大小相符,说明PPE17蛋白得到了表达和纯化(图2)。2.3 淘选结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]我国结核病防治现状与展望[J]. 陈凡,朱荣生,周菁,薛云,杨凡.  公共卫生与预防医学. 2019(04)



本文编号：2917882