HIV-1 Nef蛋白对宿主限制因子SERINC5拮抗机制的研究

发布时间：2020-12-18 23:08

　　SERINC5（Ser5）是于2015年首次报道的一种具有10-12次跨膜结构的宿主限制性因子,有着很强的抗HIV-1病毒的功能。区别于其他已经被报道的宿主限制因子,SERINC5的抗病毒能力发挥在HIV-1病毒生命周期的晚期阶段,其主要的作用机制是随着细胞膜包装进病毒,并且包装进病毒的量越大,降低释放病毒感染力的能力越强。多篇文章报道,HIV-1病毒中辅助蛋白Nef蛋白缺失时包装出来的病毒上含有大量的SERINC5蛋白,使得病毒的感染力极低;而当病毒中含有Nef蛋白时,则SERINC5包装进病毒颗粒的含量减少,使病毒恢复了较强的感染力,这说明Nef对SERINC5的拮抗能力很大程度上限制了SERINC5的抗病毒功能。所以,阐明Nef蛋白与SERINC5之间的作用机制对于研究具有新型靶点的抗HIV-1药物至关重要。目前人们对于其拮抗机制的认识仅仅局限于认为Nef会改变SERINC5包装进病毒颗粒的含量,而对于具体的作用机制尚缺少相关的报道。因此本论文根据前期的报道,提出了Nef是通过影响SERINC5在细胞内的蛋白表达量来实现其对SERINC5拮抗作用的假说,并且围绕Nef对SERIN... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Fig3.2SERINC5-VR1012质粒构建电泳图(a)SERINC5PCR片段；(b)SERINC5-VR1012质粒小提；(c)SERINC5-VR1012

同样利用PCR技术，获取并扩增了SERINC5的目的片段，通过凝胶电泳鉴定了PCR产物，鉴定目的片段大小正确，约为1400bp，如图Fia）。然后，利用HindⅢ和BamHⅠ限制性核酸内切酶将PCR产物和pEYFP-N1达载体酶切，通过T4连接酶将目的片段与载体连接在一起后，经过转化、提取质粒等步骤后，获得了连入的目的片段的质粒。对获得的质粒，首先进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，质粒大小正确，约为3000下来，用SalⅠ和BamHⅠ对质粒进行双酶切鉴定，载体和目的片段大小正别约为4700bp和1400bp。最后，将双酶切鉴定正确的质粒进行测序，测序确，结果如图Fig 3.3（b）（c）。经过鉴定，最终获得了由HindⅢ和BamHⅠ的SERINC5-flag- pEYFP-N1真核表达质粒。


本文编号：2924764