重组溶瘤2型单纯疱疹病毒荧光定量PCR检测方法的建立、验证及初步应用

发布时间：2020-12-20 06:36

　　目的:建立效率高的、灵敏的针对溶瘤2型单纯疱疹病毒（Oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2）的荧光定量PCR方法,依据中国药典的方法学验证指导原则对该PCR方法进行初步的验证,并检测给药后小鼠肿瘤组织内粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colonystimulation factor,GM-CSF）的表达。方法:（1）分析oHSV2的全基因组序列,根据它的GM-CSF基因片段,登录Beacon Designer8.0软件设计一对特异性高的引物。提取前期已经重组好的阳性质粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF,超微量分光光度计测定该质粒的浓度,并根据公式换算成拷贝数,将其梯度稀释为荧光定量PCR的模板。建立标准曲线,做该方法的特异性、敏感性和重复性试验。（2）采集捐献者的血液和尿液,与10³、10⁴、10^5.5、10^6.5 copies/μL pHG52d34.5CMVhGM-CSF混合后用QIAamp DN... 

【文章来源】：湖北科技学院湖北省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SYBRGreenRealtimePCR特异性结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]利用实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测人及动物粪便中的沙门菌[J]. 陈丹妮,韩营营,李杰,闫梅英.  疾病监测. 2020(02)
[2]Ⅲ期临床试验非盲延期阶段联合使用吡仑帕奈的局灶性癫痫患者的四年药物安全性、耐受性及发作结局：307号研究[J]. Gregory L Krauss,Emilio Perucca,Patrick Kwan,覃英杰,熊维希,慕洁.  癫痫杂志. 2020(01)
[3]染料法荧光PCR鉴别卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种[J]. 张瑾,李刚,徐翮飞,薛晓宁,王勇,张娟,朱可,陈晓光.  中国国境卫生检疫杂志. 2019(05)
[4]单纯疱疹病毒2型疫苗的研究进展[J]. 柳蕾,李琦涵.  微生物与感染. 2019(04)
[5]1期临床耐受性试验键盘设计方法[J]. 郝肖迪,孙瑞华,沈庆,虞康达,吴婉玲,肖畅,王蜜源.  中南药学. 2019(06)
[6]实时荧光定量PCR技术的原理及其应用[J]. 安钢力.  中国现代教育装备. 2018(21)
[7]荧光定量PCR技术的原理及其在植物研究中的应用[J]. 黄小玲,张登,廖嘉明,欧阳昆唏.  安徽农业科学. 2018(25)
[8]实时荧光定量PCR技术的应用及研究进展[J]. 李萌,李雪,郑志强.  饲料博览. 2018(07)
[9]实时荧光定量PCR技术在细菌学检测方面应用进展[J]. 彭召红.  临床医药文献电子杂志. 2018(56)
[10]在医学检验中应用实时荧光定量PCR的研究进展[J]. 李鑫.  中西医结合心血管病电子杂志. 2017(35)

博士论文
[1]溶瘤型单纯疱疹病毒的构建及效应研究[D]. 兰萍.武汉大学 2003

硕士论文
[1]番茄斑萎病毒实时荧光定量PCR快速检测方法的建立[D]. 习凤妮.中南大学 2013
[2]葡萄根瘤蚜的荧光定量PCR检测及间种植物防控研究[D]. 郭庆.中国农业科学院 2011
[3]瓜类细菌性果斑病菌及辣椒细菌性斑点病菌的快速检测技术研究[D]. 董明明.山东农业大学 2011



本文编号：2927390