重组酶聚合酶扩增技术快速检测日本血吸虫核酸方法的建立

发布时间：2020-12-29 23:55

　　目的应用重组酶聚合酶扩增(RPA)技术,建立一种敏感、特异、简便且快速的日本血吸虫核酸检测方法。方法选择Sj28S核糖体基因片段为靶序列,用Primer Premier 5软件设计特异性引物,建立RPA扩增反应,并进行优化以确定最佳反应条件。提取不同虫期日本血吸虫,以及曼氏血吸虫、埃及血吸虫、单尾尾蚴感染钉螺、华支睾吸虫、大片形吸虫、卫氏并殖吸虫和牛带绦虫等基因组DNA,评价所建立方法的特异性和敏感性,并对不同混合比例(1∶10、 1∶50、 1∶100、 1∶250、 1∶500、 1∶1 000、 1∶2 000)的阳性和阴性钉螺基因组DNA的检出性能和重复性进行评价。结果建立的RPA方法可特异地扩增出日本血吸虫216 bp大小的目的基因片段。RPA的最佳反应条件为39℃、 20 min。该方法与曼氏血吸虫、埃及血吸虫、单尾尾蚴感染钉螺、华支睾吸虫、大片形吸虫、卫氏并殖吸虫和牛带绦虫及阴性钉螺基因组DNA均无交叉反应。针对日本血吸虫成虫基因组的最低检出限为100 fg/μl,针对重组质粒的最低检出限为100拷贝/μl,且血吸虫不同虫期的基因组DNA样本均能被准确检出。应用建立的RP... 

【文章来源】：中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2020年03期 北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

RPA检测的特异性评价结果

RPA技术具有操作简单、反应迅速、灵敏高效的优势[20]，已被广泛应用于各种寄生虫的检测。研究人员分别应用RPA技术对疟原虫、埃及血吸虫和曼氏血吸虫进行检测，均取得较好的实验效果[21-23]。目前，关于日本血吸虫感染的核酸检测已有诸多报道，本课题组前期开展的日本血吸虫核酸检测技术Meta分析结果表明，等温扩增技术的诊断效能优于依赖变温扩增设备的PCR类技术，在等温扩增技术中，RPA又具有相对的诊断优势[24]。RPA技术是近年来新兴起来的一种核酸等温扩增技术，与传统PCR相比，该方法无需高昂仪器设备，借助水浴锅，甚至是在室温下，20 min内即可完成反应，操作简便快速，有利于基层单位和边远山区的推广应用[25]。图4 不同虫期日本血吸虫基因组DNA的RPA检测结果

不同虫期日本血吸虫基因组DNA的RPA检测结果


本文编号：2946577