靶向乙型肝炎病毒核心蛋白定量检测方法的研究

发布时间：2021-01-03 09:30

　　乙型肝炎（hepatitis B）是一种由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）引起的全球范围的传染病,主要在肝脏发生病变。临床上,通过检测HBV血清标志物来辅助判断HBV感染与否、评价预后、治疗方案和药物反应等。近年来随着越来越多的研究,乙肝病毒核心蛋白（hepatitis B core protein,HBc）作为新型检测HBV手段受到广泛关注。HBc单体构成同型二聚体,进一步包裹前基因组RNA（pregenome RNA,pgRNA）和HBV聚合酶组装为正20面体的核壳体。核壳体腔内包含HBV松弛环状DNA（relax circular DNA,rcDNA）和病毒聚合酶的复合体,最终和HBV包膜蛋白（hepatitis B surface protein,HBs）相互作用形成成熟病毒颗粒。HBV感染肝脏机制的深入研究发现,HBc尤为重要。目前乙肝病毒学界的共识认为,HBc的表达量与肝细胞核内HBV共价闭合环状DNA（covalenty closed circular DNA,cccDNA）的功能活性正相关,通过定量检测HBc可以指示慢性乙肝患者体内cccDNA... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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基因电泳图谱，和为产物，为

重庆医科大学硕士研究生学位论文292结果2.1重组质粒的构建将合成的pUC-57质粒作为模板，用上下游引物HBC-F1和HBC-R1扩增目的基因HBc（图1），将目的基因与pBE-SDNA都进行双酶切，纯化，连接之后测序，阳性结果与pBE-SDNA进行对比（图2），再进行单酶切与双酶切验证（图3）。图1.HBc基因电泳图谱，1和2为PCR产物，M为DL2000DNAmarkerFig1.HBcgeneelectrophoreticmap,1and2arePCRproducts,MisDL2000DNAmarker图2.质粒电泳图谱,1为pBE-SDNA质粒，2为pBE-S/HBc重组质粒，M为λ-EcoT14DNA

重庆医科大学硕士研究生学位论文30markerFig2.Electrophoresisofplasmid,1ispBE-SDNAplasmid,2ispBE-S/HBcrecombinantplasmid,Misλ-EcoT14DNAmarker图3.质粒酶切电泳图谱，1为pBE-S/HBc重组道为质粒，2为pBE-S/HBc重组质粒单酶切，3为pBE-S/HBc重组质粒双酶切，M为DL5000DNAmarkerFig3.Electrophoresisofplasmiddigestion,1pBE-S/HBcrecombinantplasmid,2pBE-S/HBcrecombinantplasmid,3pBE-S/HBcrecombinantplasmid,MDL5000DNAmarker2.2上清中HBc的含量鉴定随机挑选50株单菌落（编号1-50）放大培养24小时，用上下游引物HBc-F1(NdeI)和HBc-R1(SalI)扩增目的基因HBc，菌液PCR检测显示（图4），50株菌种有16株包含HBc基因，分别收集16株阳性菌的培养上清做ELISA检测，检测显示（图5），12、17、21和32菌株的培养基中有HBc蛋白的阳性表达，其中32菌株分泌表达量最高。


本文编号：2954745