梅毒螺旋体黏附素Tp0750免疫保护性及诊断价值评估

发布时间：2021-01-11 20:46

　　目的:评估重组梅毒螺旋体（Tp）黏附素蛋白Tp0750（rTp0750）在新西兰兔体内诱导的免疫保护性及体外诊断价值,以筛选新的梅毒候选疫苗分子与诊断抗原。方法:1.构建原核表达载体pET-28a/Tp0750,转化入大肠埃希菌中诱导表达rTp0750并以Western blot鉴定;2.将新西兰兔随机分为三个组,即A:rTp0750（实验组）,B:rTp0751（阳性对照组）,C:PBS（阴性对照组）,用纯化重组蛋白/PBS肌注和皮下注射新西兰兔,间隔两周共免疫四次,每次免疫前收集血清检测特异性IgG抗体水平;取末次免疫后2周兔脾细胞,用CCK-8细胞增殖试剂盒及逆转录PCR（RT-PCR）试剂盒分别检测脾淋巴细胞增殖及IFN-γ的mRNA转录水平;同时在新西兰兔背部皮内注射Tp攻击感染,观察皮损直径变化及皮肤溃疡形成,实时荧光定量PCR（qPCR）检测新西兰兔不同组织部位Tp-DNA载量,光镜下观察皮损与肾脏病理组织中炎症细胞浸润。3.建立基于rTp0750的间接ELISA,检测不同时期的梅毒患者血清、正常人血清、交叉血清的特异性IgG抗体水平,评估Tp0750的诊断价值。结果:1... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pET-28a/Tp0750的PCR扩增Fig.4.1PCRamplificationofpET-28a/Tp0750.Lane1,2000-bpDNAladder;Lanes2,3:

pET-28a/Tp0750的菌液PCRFig.4.2PCRamplificationofpET-28a/Tp0750.1,1500-bpDNAladder;3and5,pET-28a

26图4.2pET-28a/Tp0750的菌液PCRFig.4.2PCRamplificationofpET-28a/Tp0750.1,1500-bpDNAladder;3and5,pET-28a/Tp0750；2and4,negativecontrol.4.3原核表达载体pET-28a/Tp0750的测序及比对测序结果与GenBank上的母的序列进行Blast比对，结果显示无碱基突变。测序结果与Blast比对见附录。4.4Tp0750的表达与纯化将测序结果正确的原核表达载体pET-28a/Tp0750转入E.coilBL21菌中，分别在不同温度，不同浓度IPTG诱导4h，取菌液上清和沉淀进行SDS-PAGE跑胶分析最佳诱导条件。最佳诱导条件为37℃，IPTG终浓度为1.0mM（图4.3）。图4.3pET-28a/Tp0750重组蛋白的诱导表达Fig4.3ExpressionofrecombinantproteinpET-28a/Tp0750

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组梅毒螺旋体诊断抗原的研究进展[J]. 王斯倩,符波,赵宇龙,廖梦佳,李长清,曹龙古,曾铁兵.  中国人兽共患病学报. 2019(09)
[2]Assessment of the immune responses to Treponema pallidum Gpd DNA vaccine adjuvanted with IL-2 and chitosan nanoparticles before and after Treponema pallidum challenge in rabbits[J]. ZHAO FeiJun,ZHANG XiaoHong,LIU ShuangQuan,ZENG TieBing,YU Jian,GU WeiMing,ZHANG YueJun,CHEN Xi,WU YiMou.  Science China（Life Sciences）. 2013(02)



本文编号：2971453