巯基化Ras相关蛋白7a抑制人肝癌细胞系HepG2.2.15中HBV复制

发布时间：2021-01-28 06:41

　　目的探究人肝癌细胞HepG2.2.15中Ras相关蛋白7a （Rab7a）的巯基化机制及其对乙型肝炎病毒（HBV）复制的影响。方法通过生物素转换实验检测H₂S对HepG2.2.15细胞中Rab7a巯基化水平的影响并验证Rab7a的巯基化位点;通过酶联免疫法、RT-qPCR和Western blot检测巯基化的Rab7a对HBV复制标志物水平的影响。结果在HepG2.2.15细胞中H₂S可增强内源性Rab7a的巯基化水平（P<0.01）;NaHS（H₂S速释供体）可增强外源性Rab7a的巯基化表达,但其巯基化位点突变后则不受NaHS影响（P<0.01）;Rab7a巯基化后,可抑制HepG2.2.15细胞上清中HBsAg、HBeAg和HBV-DNA及细胞内HBV-cccDNA、3.5kb RNA、total RNA和HBcAg蛋白的表达（P<0.05）。结论 Rab7a的巯基化抑制HBV阳性细胞系HepG2.2.15细胞中HBV的复制水平。 

【文章来源】：基础医学与临床. 2020,40(01)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

NaHS对过表达Rab7a巯基化位点的验证

NaHS处理后Rab7a过表达组细胞上清中HBV DNA、乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的表达明显低于对照组(P<0.05),Rab7a(Δ)突变组较对照组细胞上清HBV标志物的表达水平无明显差异(图3)。2.4 Rab7a对HepG2.2.15细胞中HBV标志物影响

Rab7a属于GTPase家族,以Rab7a GDP和Rab7aGTP两种形式的转换以及Rab7a在胞质和膜之间的转位完成Rab7a对囊泡运输的调控,发挥特有的生物功能。已有报道,在HBV进入细胞初期,Rab5a和Rab7a协助HBV早期内体到晚期内体的转运[8];而在HBV病毒复制的后期,Rab7a活化形式的过表达抑制HBV病毒的扩增,降低病毒载量,相反,敲低Rab7a能够减少病毒向降解溶酶体的传递,增强HBV的释放[9-10]。本研究中H2S使Rab7a第83、83、和143位半胱氨酸发生巯基化,从而激活Rab7a,巯基化的Rab7a显著降低HBV标志物的表达,发挥抑制HBV的复制的作用。H2S介导的巯基化修饰通过作用于关键半胱氨酸残基,从而调节多种细胞生理病理过程,这也为在HBV相关信号通路和机制研究提供了新的策略。

【参考文献】：
硕士论文
[1]ADAR1和ADAR2通过对MAVS基因的3’UTR进行RNA编辑影响HBV表达机制的研究[D]. 李涛.北京协和医学院 2017



本文编号：3004529