凝集素LTL识别的乙肝相关肝癌患者唾液中特异性糖链结构的研究
发布时间：2021-01-28 18:09
研究背景:肝癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）在我国属于高发病率和高死亡率的癌症。目前,HCC的各种检测方法分别受其技术特点的限制,均存在特异性低、取样不便和不能早期诊断等缺陷。近年来有大量研究表明:随着肿瘤的发生发展,患者的肿瘤组织、血清和唾液等体液中发生了糖蛋白糖基化异常改变。实验方法:本研究以唾液为检测样本,比较健康志愿者（Healthy Volunteers,HV）,慢性乙型肝炎患者（Viral Hepatitis-B Patients,HB）,乙肝后肝硬化患者（Hepatic Cirrhosis Patients,HC）和HCC患者的唾液糖蛋白糖链差异。利用一款本实验室自制的专用于肝病检测的小规模凝集素芯片对215例唾液样本（51例HV,51例HB,68例HC和45例HCC）进行逐例检测,目的是筛选可以特异性指示HCC患者唾液异常糖基化的凝集素;并且进一步利用90例慢性肝病患者唾液样本（30例HB,30例HC和30例HCC）和30例HV唾液样本进行唾液芯片、凝集素印迹实验验证。此后利用该凝集素偶联磁性微粒并分离纯化特定的糖蛋白,对分离纯化获得的糖蛋...
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
由HBV引发的“慢性乙型肝炎、乙肝后硬化、肝癌”发展过程示意图
图 1.2 各种糖链结构及其与细胞间关系[14]糖基化具有重要的生物学意义：例如胞外基质中纤黏连蛋白和层粘连蛋白等糖蛋白作为重要的结构分子为细胞外环境提供缓冲、润滑环境；细胞间粘附分子（CellAdhesion Molecule，CAM）多以跨膜糖蛋白的形式存在于细胞表面，其暴露在膜外的部分往往有糖链修饰并参与细胞间的粘附；有的糖链作为特殊的抗原位点被对应的生物分子识别形成特殊的免疫机制，例如人体的 ABO 血型物质即由血红细胞表面糖蛋白糖链末端H抗原（Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-）的Gal上是否被半乳糖（Galactose，Gal）或乙酰半乳糖胺（Acetyl Galactosamine，GalNAc）所修饰而决定，据此红细胞表面糖链与血液内抗体共同形成了血液的排异系统[15]；目前糖生物学的研究中普遍认为糖基化过程中参与调控的酶调节如若发生异常，随之而变的糖蛋白（Glycoproteins）或糖脂（Glycolipids）上的糖链结构改变则会引起多种异常的生理状态甚至引发多种疾病[16,17]，因此糖链的改变不仅是疾病发生发展过程中反映出的特征变化，并且其本
图 2.1 一款专用于肝病检测的 14 探针凝集素芯片阵列示意图凝集素芯片检测样本之前，从 4℃取出芯片，于 37℃真空干随后利用 1×PBST 于水平震荡摇床 70rpm 清洗 5min×2 次，再 次，以充分清洗未偶联至玻片上的游离凝集素。清洗完成后残留的 PBS。在上样前，向孵育盒的各阵列区域内先加入 液对玻片空白表面的环氧化基团进行封闭以降低荧光扫描时育盒密封后于恒温孵育箱内37℃反应1h，封闭完成后，1×PBSS 清洗 5min×2 次，甩干后向孵育盒的各阵列区域内加入蛋白集素芯片孵育液，8μL4M 羟胺，2μL0.1% Tween-20，4μg Cy超纯水补足终体积至 120μL），于 37℃恒温孵育 3h，待反应结×2 次， 1×PBS 清洗 5min×2 次，甩干并扫描。凝集素芯片最 公司所产的 Genepix 4000B 芯片扫描仪实现，扫描参数设定MT 功率 70%，激发强度为 100%。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型肝炎五项测定对乙型肝炎诊断的意义[J]. 杨丽平,姚萃. 当代医学. 2015(04)
[2]血清AFP-L3、GP73检测联合CT扫描在肝细胞癌诊断中的价值[J]. 贾红莲,黄彩云,宋君利,李世龙,周秀艳,王晓蕊. 现代肿瘤医学. 2015(01)
[3]AFP、AFU和DCP联合检测对原发性肝癌的诊断意义[J]. 李生,林英辉,潘元平,潘爱萍. 安徽医药. 2013(10)
[4]肝纤维化及肝硬化诊断方法的研究进展[J]. 李杰,邹俊,陈茂伟. 山东医药. 2011(45)
本文编号：3005444
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
由HBV引发的“慢性乙型肝炎、乙肝后硬化、肝癌”发展过程示意图
图 1.2 各种糖链结构及其与细胞间关系[14]糖基化具有重要的生物学意义：例如胞外基质中纤黏连蛋白和层粘连蛋白等糖蛋白作为重要的结构分子为细胞外环境提供缓冲、润滑环境；细胞间粘附分子（CellAdhesion Molecule，CAM）多以跨膜糖蛋白的形式存在于细胞表面，其暴露在膜外的部分往往有糖链修饰并参与细胞间的粘附；有的糖链作为特殊的抗原位点被对应的生物分子识别形成特殊的免疫机制，例如人体的 ABO 血型物质即由血红细胞表面糖蛋白糖链末端H抗原（Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-）的Gal上是否被半乳糖（Galactose，Gal）或乙酰半乳糖胺（Acetyl Galactosamine，GalNAc）所修饰而决定，据此红细胞表面糖链与血液内抗体共同形成了血液的排异系统[15]；目前糖生物学的研究中普遍认为糖基化过程中参与调控的酶调节如若发生异常，随之而变的糖蛋白（Glycoproteins）或糖脂（Glycolipids）上的糖链结构改变则会引起多种异常的生理状态甚至引发多种疾病[16,17]，因此糖链的改变不仅是疾病发生发展过程中反映出的特征变化，并且其本
图 2.1 一款专用于肝病检测的 14 探针凝集素芯片阵列示意图凝集素芯片检测样本之前，从 4℃取出芯片，于 37℃真空干随后利用 1×PBST 于水平震荡摇床 70rpm 清洗 5min×2 次，再 次，以充分清洗未偶联至玻片上的游离凝集素。清洗完成后残留的 PBS。在上样前，向孵育盒的各阵列区域内先加入 液对玻片空白表面的环氧化基团进行封闭以降低荧光扫描时育盒密封后于恒温孵育箱内37℃反应1h，封闭完成后，1×PBSS 清洗 5min×2 次，甩干后向孵育盒的各阵列区域内加入蛋白集素芯片孵育液，8μL4M 羟胺，2μL0.1% Tween-20，4μg Cy超纯水补足终体积至 120μL），于 37℃恒温孵育 3h，待反应结×2 次， 1×PBS 清洗 5min×2 次，甩干并扫描。凝集素芯片最 公司所产的 Genepix 4000B 芯片扫描仪实现，扫描参数设定MT 功率 70%，激发强度为 100%。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型肝炎五项测定对乙型肝炎诊断的意义[J]. 杨丽平,姚萃. 当代医学. 2015(04)
[2]血清AFP-L3、GP73检测联合CT扫描在肝细胞癌诊断中的价值[J]. 贾红莲,黄彩云,宋君利,李世龙,周秀艳,王晓蕊. 现代肿瘤医学. 2015(01)
[3]AFP、AFU和DCP联合检测对原发性肝癌的诊断意义[J]. 李生,林英辉,潘元平,潘爱萍. 安徽医药. 2013(10)
[4]肝纤维化及肝硬化诊断方法的研究进展[J]. 李杰,邹俊,陈茂伟. 山东医药. 2011(45)
本文编号：3005444
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