XBP1正性调节MANF在慢性乙型肝炎组织中的表达

发布时间：2021-02-02 10:26

　　乙型肝炎（hepatitis B）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的,以肝脏炎性病变为主,并能引起其他多器官病变的疾病。部分乙肝患者转化为肝硬化及肝癌,严重威胁生命健康。文献报道,HBV感染可以引起肝细胞发生内质网ER（endoplasmic reticulum,ER）应激,而ER应激会激活非折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）。MANF（Mesencephalic Astrocyte-derived Neurotrophic Factor）是一种对ER应激敏感的蛋白,在ER应激时特异性高表达。MANF在细胞中起着保护细胞避免ER应激导致的细胞凋亡。我们的发现发现,MANF的启动子区存在ER应激反应元件,但UPR分支信号如何影响MANF的表达目前还不清楚。本研究主要观察HBV诱导的肝组织的ER应激以及UPR分支通路对MANF表达的影响。结果如下:（1）通过对收集的肝炎病人组织切片免疫组化及肝炎病人组织Q-PCR方法检测,发现ER应激主要标志蛋白BIP,CHOP的的表达上调,且表达水平随着肝炎的病程进展逐渐升高。（2）采用免疫组化及Q-PCR方法对肝炎... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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Abstract
1. 前言
2. 实验材料
    2.1 细胞株
    2.2 标本收集
    2.3 抗体
    2.4 实验用引物以及si RNA设计
    2.5 实验用试剂
    2.6 实验仪器
3. 实验方法
    3.1 免疫组化
    3.2 实时荧光定量PCR
        3.2.1 RNA的提取
        3.2.2 RNA的逆转录
        3.2.3 QPCR试验方法的建立
    3.3 免疫荧光双标
    3.4 免疫共沉淀（co-ip）
        3.4.1 裂解细胞
        3.4.2 耦联抗体
        3.4.3 CO-IP
    3.5 染色质免疫共沉淀
        3.5.1 交联和细胞分离
        3.5.2 染色质断裂
        3.5.3 免疫共沉淀实验
        3.5.4 IP洗脱
        3.5.5 DNA恢复
        3.5.6 PCR检测
    3.6 免疫印迹实验
        3.6.1 蛋白样品的制备
        3.6.2 SDS-PAGE凝胶电泳
    3.7 细胞转染
    3.8 肝炎病人组织标本的收集
    3.9 统计学分析
4. 实验结果
    4.1 乙肝病人肝组织中BIP的表达
    4.2 乙肝病人肝组织中CHOP的表达
    4.3 乙肝病人肝组织中MANF的表达
    4.4 乙肝病人肝组织中XBP1的表达
    4.5 MANF和XBP1/XBP1s在肝炎组织中的共表达
    4.6 MANF与XBP1在细胞内相互作用
    4.7 XBP1s在MANF的转录调控中起关键作用
    4.8 抑制IRE1α 核酸酶活性降低MANF的表达
    4.9 XBP1与MANF基因启动子序列相互作用
5.讨论
6. 结论
7.参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]人中脑星形胶质来源的神经营养因子基因启动子区域的克隆及活性检测[J]. 张利,陆鹏,王涛,沈玉先.  中国药理学通报. 2012(06)



本文编号：3014541