泡球蚴源性外泌体对巨噬细胞的影响

发布时间：2021-02-19 13:39

　　目的:泡球蚴源性外泌体对巨噬细胞的极化作用,并探索出促进巨噬细胞极化的最适浓度。方法:1.从感染泡球蚴的BALB/c小鼠病灶中泡球蚴原头节,进行体外培养,收集上清,分离获取上清中泡球蚴源性外泌体。2.巨噬细胞培养并诱导为成熟M1型巨噬细胞。3.设置不同的外泌体浓度分别与M1型巨噬细胞共同培养,4.检测M1和M2型巨噬细胞相关细胞因子及表面抗体,同时确定泡球蚴源性外泌体与巨噬细胞作用的最佳浓度。ELISA和流式细胞技术分别检测M1型巨噬细胞相关指标:IL-6、TGF-α及表面CD16/32分子表达水平,M2型巨噬细胞指标:IL-10水平;表面CD206和CD369分子表达水平,统计分析。结果:我们成功构建泡球蚴原头节感染BALB/c小鼠模型,并在感染小鼠病灶的病理组织切片中找到原头节,在培养原头节的上清中,透射电镜下观察到大小约100nm,多为圆形,形似杯样或茶托样的外泌体,表面特异性分子TSG101和CD9表达阳性,CD63为弱阳性。将不予外泌体刺激作为空白对照,不同浓度外泌体与巨噬细胞共培养72h,ELISA检测结果显示细胞因子TGF-α、IL-10和IL-6表达水平均有不同程度升高... 

【文章来源】：青海大学青海省 211工程院校

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要符号对照表
第一章 前言
第二章 材料与器材
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 巨噬细胞
    2.2 主要试剂
    2.3 主要仪器
第三章 实验方法
    3.1 泡球蚴源性外泌体获取
        3.1.1 构建泡球蚴感染BALB/c小鼠模型
        3.1.2 泡球蚴原头节的提取
        3.1.3 泡球蚴原头节培养及上清收集
        3.1.4 泡球蚴源性外泌体的提取（使用超速离心法提取）
        3.1.5 泡球蚴源性外泌体的鉴定
        3.1.6 泡球蚴源性外泌体的浓度检测（蛋白浓度测定间接测定外泌体浓度）
        3.1.7 Western Blot检测方法
    3.2 ELISA的使用
    3.3 流式细胞仪的使用
    3.4 实验路线图
    3.5 统计学方法
第四章 实验结果
    4.1 感染泡球蚴的BALB/c小鼠模型及鉴定
        4.1.1 感染泡球蚴的BALB/c小鼠模型
        4.1.2 感染泡球蚴的BALB/c小鼠模型的鉴定
    4.2 泡球蚴源性外泌体鉴定
    4.3 流式实验检测结果
    4.4 ELISA实验检测结果
    4.5 M2/M1型巨噬细胞相关细胞因子及表面分子的比值
第五章 讨论
第六章 结论
    6.1 结论
    6.2 不足之处
参考文献
致谢
附录 综述 寄生虫源性外泌体在寄生虫感染与免疫中的研究进展
    参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]巨噬细胞极化在小鼠泡型包虫病中的作用[J]. 王东旭,王虎,樊海宁,王海久,王志鑫,汤锋,廖梦姣,王强.  中国高原医学与生物学杂志. 2018(02)
[2]寄生虫来源的外泌体及其功能研究进展[J]. 范晓斌,何兴,潘卫庆.  中国热带医学. 2017(12)
[3]M2型巨噬细胞极化及相关疾病的研究进展[J]. 郑新,王红艳.  生命科学. 2017(09)
[4]复杂肝包虫病的外科治疗[J]. 陈哲宇.  中国普外基础与临床杂志. 2017(07)
[5]细胞外囊泡研究新进展[J]. 王琎,陈建英.  中国组织工程研究. 2017(04)
[6]Current status of diagnosis and treatment of hepatic echinococcosis[J]. Memmet Mihmanli,Ufuk Oguz Idiz,Cemal Kaya,Uygar Demir,Ozgur Bostanci,Sinan Omeroglu,Emre Bozkurt.  World Journal of Hepatology. 2016(28)
[7]巨噬细胞极化信号通路及其调控机制研究进展[J]. 田媛,刘起会,朱迅,闫东梅.  现代免疫学. 2015(05)
[8]外泌体及其在肿瘤诊疗中的意义[J]. 张敏,张晨光,丁卫.  生理科学进展. 2014(05)
[9]中性粒细胞杀灭阴道毛滴虫作用的研究[J]. 赵建玲,高兴政,屈明.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2008(05)
[10]阿苯达唑治疗泡球蚴病患者血清中Th1/Th2型细胞因子的变化及临床意义[J]. 李富荣,石佑恩,史大中,DA Vuitton,PS Craig.  中国人兽共患病杂志. 2003(02)

博士论文
[1]旋毛虫排泄分泌物调节巨噬细胞及成肌细胞功能的体外研究[D]. 白雪.吉林大学 2011

硕士论文
[1]巨噬细胞极化在肝泡型包虫病中的作用及机制研究[D]. 王东旭.青海大学 2018



本文编号：3041195