HIV派生的新型miRNA99对巨噬细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β和吞噬功能的影响

发布时间：2017-04-13 23:00

  本文关键词：HIV派生的新型miRNA99对巨噬细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β和吞噬功能的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨HIV派生的新型miRNA99对巨噬细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β及其吞噬功能的影响。方法:用佛波酯(PMA)刺激人单核细胞白血病细胞(THP-1)分化成贴壁的巨噬细胞,倒差显微镜下观察细胞形态并用流式细胞术测定CD11b并鉴定为巨噬细胞。将鉴定好的巨噬细胞进行分组(分为对照组、LipidA组、miRNA-TAR组、miRNA99组),采用转染试剂将化学合成的miRNAs瞬时转染至巨噬细胞内或用LipidA作用巨噬细胞,用人TNF-α、IL-6、IL-1βELISA试剂盒测定细胞上清液TNF-α、IL-6、IL-1β的水平。采用共聚焦显微镜观察巨噬细胞吞噬荧光标记的大肠杆菌的情况。将各组已吞噬荧光标记的大肠杆菌的巨噬细胞制成单细胞悬液,用流式细胞术检测各组细胞的吞噬率。结果:1.未经PMA刺激的THP-1细胞呈单个悬浮状态,圆形或类圆形,葡萄串样聚集;经PMA刺激后细胞贴壁生长,细胞伸出伪足,呈梭形或多边形,表明THP-1基本分化为巨噬细胞。2.经PMA刺激24小时后细胞表面CD11b阳性率在99%以上,说明THP-1细胞已大部分分化为巨噬细胞,可以用于后期的实验。3.LipidA组与miR99组Mφ培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量均明显高于对照组(p0.05),有统计学差异。但miR-TAR组与对照组无明显差异(p0.05)。而且miR99组较LipidA组TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显升高,p0.05,有统计学差异。4.巨噬细胞胞浆内呈现绿色荧光,说明巨噬细胞已吞噬荧光标记的大肠杆菌。5.各组巨噬细胞吞噬细菌的能力不同,经miRNA99刺激的巨噬细胞吞噬细菌的能力较对照组明显降低。前期研究已证明内毒素能抑制巨噬细胞的吞噬功能。从上图中得出,miRNA99组较LipidA组吞噬率降低明显,说明miRNA99对巨噬细胞吞噬功能的损害较内毒素更明显。结论:1.miRNA99使巨噬细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β增多;2.miRNA99使巨噬细胞的吞噬功能下降。
【关键词】：miRNA 巨噬细胞 TNF-α IL-6 IL-1β 吞噬功能
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.91
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 常用缩写词中英文对照表9-10
• 前言10-11
• 1 材料与方法11-13
• 1.1 材料11
• 1.2 方法11-13
• 2 结果13-19
• 2.1 经PMA刺激后的单核细胞白血病细胞形态13
• 2.2 巨噬细胞表达CD11b的情况13-14
• 2.3 各组巨噬细胞上清培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β的水平14-15
• 2.4 吞噬荧光标记的大肠杆菌的巨噬细胞在荧光共聚焦显微镜下的图片15-16
• 2.5 各组巨噬细胞吞噬荧光标记的大肠杆菌后吞噬率的情况16-19
• 3 讨论19-23
• 4 结论23-24
• 4.1 miRNA99使巨噬细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β增多23
• 4.2 miRNA99使巨噬细胞的吞噬功能下降23-24
• 参考文献24-26
• 综述26-36
• 参考文献32-36
• 致谢36-37
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果37-38
• 个人简历38

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