日本血吸虫过氧化物氧化还原蛋白SjPrx Ⅰ的表达、纯化及对Th2免疫偏移的影响

发布时间：2017-04-15 04:04

  本文关键词：日本血吸虫过氧化物氧化还原蛋白SjPrx Ⅰ的表达、纯化及对Th2免疫偏移的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景血吸虫病,又称为裂体吸虫病,它是一种传染性的寄生虫病,可分为肠血吸虫病和尿路血吸虫病。根据患者病情急缓不同以及宿主体内虫卵的分布位置不同,血吸虫病的临床表现不一,主要症状有畏寒、发热、消瘦、淋巴结及肝脾肿大等。血吸虫病的发生主要是由于宿主感染了裂体吸虫属血吸虫,而能够传染给人类的血吸虫主要有三种,即埃及血吸虫、曼氏血吸虫和日本血吸虫,我国主要流行的是日本血吸虫病[1]。血吸虫的早期感染是以Th1反应为主的;大约在血吸虫尾蚴感染6W时雌虫开始产卵,宿主出现以Th2为主的优势应答,体内Th2型细胞因子分泌增多。8-9W后,Th2应答达到高峰,此后Th1和Th2型细胞因子分泌水平均有所下降;12W后虫卵内毛蚴死亡,SEA逐渐减少至消失,肉芽肿体积减小,形成局部纤维化。发生Th1型向Th2型的免疫偏移[2]。根据Th1/Th2免疫偏移理论,人们易于理解血吸虫感染诱导的Th2免疫应答可以抑制Th1介导的自身免疫性疾病;血吸虫病感染后期,宿主体内的Th1型的免疫应答转化成Th2型,血吸虫病转为慢性,说明Th2型免疫应答可抑制Th1型免疫应答,这一现象对于Th1介导的自身免疫性疾病有积极意义。越来越多的研究表明以Th2型免疫应答为主的寄生虫感染可以减轻Th1介导的自身免疫性疾病[3]。人们在在肝片吸虫和曼氏血吸虫感染的小鼠模型中,发现了分泌型的抗氧化剂Prx。研究表明在血吸虫中Prx负责将电子从谷胱甘肽(GSH)和硫氧还蛋白(Trx)转移到H2O2,因此,Prx在血吸虫分解H2O2的过程中发挥关键作用,是其解毒功能的一个瓶颈分子,也是潜在的治疗靶标[4]。目的:通过虫源性蛋白SjPrxⅠ表达、纯化,感染小鼠和刺激细胞,研究SjPrxⅠ在体内外诱导Th2免疫应答的相关机制,从而进一步揭示虫体免疫逃避、宿主免疫耐受、免疫偏移等的分子机制。方法:本实验首先Gen Bank中找到SjPrxⅠ序列,设计引物进行PCR扩增,通过转化将连接产物转入感受态细胞,然后小量表达菌株,电泳检测单克隆成功表达。在western验证蛋白后,大量摇菌表达蛋白后进行纯化,得到大量高纯度的SjPrxⅠ蛋白。通过腹腔注射免疫小鼠,ELISA检测脾脏细胞分泌细胞因子的改变。对Sj PrxⅠ蛋白诱导Th2免疫偏移的机制进行全面分析。结果:(1)大量表达、纯化后可得到浓度达0.8mg¤ml的SjPrxⅠ蛋白。(2)LPS刺激的小鼠其脾细胞培养物上清的IL-2、IFN-γ、TNF-α比正常小鼠明显增高(3)SjPrxⅠ刺激的小鼠其脾细胞培养物上清的IL-4、IL-10与IL-13正常小鼠明显增高(4)LPS和SjPrxⅠ共同刺激小鼠其脾细胞培养物上清与LPS刺激的小鼠其脾细胞和SjPrxⅠ的培养物上清和单独LPS或SjPrxⅠ刺激的小鼠其脾细胞培养物上清IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13均无明显变化,统计学无意义。结论:本实验研究结果显示日本血吸虫过氧化物氧化还原蛋白中国大陆株SjPrxⅠ属于可溶性蛋白,通过转化方式可以得到单克隆表达菌,纯化可得到高浓度(0.8mg/ml)蛋白。SjPrxⅠ刺激小鼠后其脾脏细胞悬液细胞因子的变化趋向于Th2偏移,但体内同时注射LPS和蛋白以及LPS刺激小鼠的脾细胞加入蛋白培养后的细胞悬液的IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13均高表达,但与单独腹腔注射LPS或者Sj PrxⅠ比较p0.05,无统计学意义。
【关键词】：日本血吸虫 过氧化物氧化还原蛋白 Th2型免疫应答
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R532.21
【目录】：

• 英文缩略词对照表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-15
• 材料与方法15-33
• 结果33-39
• 讨论39-41
• 结论41-42
• 参考文献42-44
• 附录44-51
• 1、个人简历44-45
• 2、致谢45-46
• 3、综述46-51
• 参考文献50-51

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本文编号：307548