通过蛋白组学方法初步筛选影响疟原虫配子体感染活力的基因
发布时间:2021-03-11 01:56
目的:疟疾是疟原虫通过媒介昆虫蚊传播的最为严重的寄生原虫感染性疾病,有数十万人因罹患疟疾而死亡。疟原虫的发育经历肝内期、红内期和蚊内期三个发育阶段,以及脊椎动物和昆虫蚊两任宿主。配子体是连接疟原虫脊椎宿主和蚊宿主之间的唯一桥梁,是导致人蚊传播的关键。在疟原虫发育过程中,存在自然传播阻断现象,即随着疟原虫的增殖,配子体数量增加但配子体的感染力却出现降低的现象。说明配子体是疟原虫发育过程中的重要环节,探讨其在自然传播阻断现象中的机制,无疑为阻断人蚊传播、根治疟疾疾病提供新的科研思路及解决方法。本研究通过蛋白质组学方法比较感染后不同时间疟原虫配子体表达蛋白的差异,初步筛选影响疟原虫配子体活力的相关蛋白基因,并通过基因重组技术对候选基因进行生物学功能预判。研究方法:1.鼠疟模型建立及配子体活力检测。6-8周,雌性BALB/c小鼠腹腔注射1×106个野生型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)和伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)感染红细胞,感染后第2天动态监测小鼠红细胞感染率及配子体率;雄配子出丝情况;体外动合子培养数量。2.筛选感染不同时间疟原虫...
【文章来源】:中国医科大学辽宁省
【文章页数】:56 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
自然传播阻断现象图1A,B为伯氏疟原虫感染率,配子体率,出丝,动合子;图1C,D为约氏疟原虫感染率,配子体率,出丝,动合子;*.P<0.05,**.P<0.01
中国医科大学硕士学位论文16图2检验生物重复或技术重复样本的定量结果图2B中重复样本之间的聚集程度越好代表定量重复性越好此系数是度量两组数据线性相关程度的值:图2C当皮尔森系数越接近-1为负相关,越接近1为正相关,越接近0为不相关。横轴是相对定量蛋白质值的log2对数值,纵轴是显着性检验的p值的log-log10值。以1.5的差异系数为极限,图右侧的数字表示明显差异表达的上调蛋白,左侧的数字表示明显差异表达的下调蛋白(图3A),频率直方图表示上调蛋白质的数量在左侧,是下调蛋白质的数量(3B),说明疟原虫感染后第5天的蛋白质组和第3天相比,有167个基因表达蛋白上调,106个基因表达蛋白下调。
中国医科大学硕士学位论文17图3差异表达蛋白数量红色表示显著差异表达量上调蛋白数量,蓝色表示显著差异表达下调蛋白数量通过PlasmoDB数据预测167个上调基因中有红内期转录基因101个,配子体期转录基因29个,红内期和配子体两个时期均有的转录基因为37个,红内期转录基因占总上调基因82.63%;106个下调基因中红内期转录基因9个,配子体期转录基因81个,红内期和配子体两个时期均有的转录基因为16个,配子体期转录基因占总下调基因91.51%(图4A)。上调基因中多为红内期转录蛋白,说明感染5天后,疟原虫红内期无性增殖的疟原虫活力正常,原虫处于良好的增殖状态。而感染后5天疟原虫总蛋白中表达下调基因主要是表达于配子体期的蛋白,进一步说明随着疟原虫感染进程,虽然配子体的数量持续增多,但其蛋白表达却呈下调状态。81个下调的配子体期蛋白只在雌配子体期转录的有4个,只在雄配子体期转录的有71个,雌雄配子体期均转录的有6个(图4B)。感染过程中蛋白表达下调得基因主要存在于雄性配子体。
本文编号:3075660
【文章来源】:中国医科大学辽宁省
【文章页数】:56 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
自然传播阻断现象图1A,B为伯氏疟原虫感染率,配子体率,出丝,动合子;图1C,D为约氏疟原虫感染率,配子体率,出丝,动合子;*.P<0.05,**.P<0.01
中国医科大学硕士学位论文16图2检验生物重复或技术重复样本的定量结果图2B中重复样本之间的聚集程度越好代表定量重复性越好此系数是度量两组数据线性相关程度的值:图2C当皮尔森系数越接近-1为负相关,越接近1为正相关,越接近0为不相关。横轴是相对定量蛋白质值的log2对数值,纵轴是显着性检验的p值的log-log10值。以1.5的差异系数为极限,图右侧的数字表示明显差异表达的上调蛋白,左侧的数字表示明显差异表达的下调蛋白(图3A),频率直方图表示上调蛋白质的数量在左侧,是下调蛋白质的数量(3B),说明疟原虫感染后第5天的蛋白质组和第3天相比,有167个基因表达蛋白上调,106个基因表达蛋白下调。
中国医科大学硕士学位论文17图3差异表达蛋白数量红色表示显著差异表达量上调蛋白数量,蓝色表示显著差异表达下调蛋白数量通过PlasmoDB数据预测167个上调基因中有红内期转录基因101个,配子体期转录基因29个,红内期和配子体两个时期均有的转录基因为37个,红内期转录基因占总上调基因82.63%;106个下调基因中红内期转录基因9个,配子体期转录基因81个,红内期和配子体两个时期均有的转录基因为16个,配子体期转录基因占总下调基因91.51%(图4A)。上调基因中多为红内期转录蛋白,说明感染5天后,疟原虫红内期无性增殖的疟原虫活力正常,原虫处于良好的增殖状态。而感染后5天疟原虫总蛋白中表达下调基因主要是表达于配子体期的蛋白,进一步说明随着疟原虫感染进程,虽然配子体的数量持续增多,但其蛋白表达却呈下调状态。81个下调的配子体期蛋白只在雌配子体期转录的有4个,只在雄配子体期转录的有71个,雌雄配子体期均转录的有6个(图4B)。感染过程中蛋白表达下调得基因主要存在于雄性配子体。
本文编号:3075660
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