辛伐他汀通过抑制入胞降低人偏肺病毒复制
发布时间：2021-04-15 18:32
人偏肺病毒（human metapneumovirus,hMPV）是引起儿童急性下呼吸道感染的重要病原。其引起的重症肺炎、呼吸衰竭、多脏器损害对免疫缺陷者、移植后病人、老人可能带来致死性后果。与其他病毒协同作用可显著增加原有感染的严重程度。但是目前,临床上尚无有效的疫苗可用于预防。本课题组前期致力于hMPV入胞机制的研究,以期通过阻断入胞而达到减少病毒感染的目的。我们课题组前期研究证实hMPV通过胞吞方式入胞,并且同时证实脂筏在hMPV胞吞过程起重要作用。脂筏是细胞膜上具有转运功能的微结构域,胆固醇是其重要组成成分,在其结构和功能中起重要作用。基于此发现,我们推测降低胆固醇的药物或许可通过抑制脂筏的合成从而降低hMPV病毒感染复制进而抑制感染。而他汀类药物是作为临床广泛使用的一类安全廉价的降脂药。本研究拟选取临床常用的他汀类药物-辛伐他汀为研究目标,从体内和体外实验水平探讨其对hMPV感染的影响及可能的作用机制。这种“老药新用”的尝试或许能为hMPV预防和治疗提供新的研究策略和研究思路和治疗策略。
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
hMPV感染VeroE6细胞后GFP表达情况
图 1-2 辛伐他汀和外源性胆固醇对 hMPV 复制和释放的影响Figure 1-2 Effect of simvastain and exogenous cholesterol on hMPV replication andrelease in 16HBE cells2.3 辛伐他汀对 hMPV 胞吞入胞量的影响不同浓度辛伐他汀(20, 40μM) 37℃处理 16HBE 一小时后接入 MOI=10 的hMPV 后固定，间接免疫荧光染色，运用激光共聚焦显微技术观察 hMPV-N 蛋白的红色荧光在 16HBE 细胞内的分布情况。(A) 40μM 辛伐他汀处理后，16HBE 细胞内的 hMPV-N 红色荧光明显减少，补充 500μM 外源性胆固醇后，部分细胞内的hMPV-N 红色荧光增加；用 CTB（绿色荧光）标记脂筏。CTB 入胞量被辛伐他汀抑制，其抑制作用能被胆固醇逆转。(B) 统计 10 个细胞中 hMPV-N 红色荧光点数。(C) 统计 10 个细胞中的 CTB 平均荧光强度。
重庆医科大学硕士研究生学位论文.4 流式检测辛伐他汀对 hMPV-GFP 荧光阳性率的影响在构建过程中，绿色荧光蛋白（GFP）的基因被插入到 hMPV 的 F 基因质，因此实验所用的 hMPV 能发出绿色荧光，且绿色荧光阳性率可代表 hMPV率。使用流式细胞仪检测辛伐他汀对 hMPV-GFP 荧光阳性率的影响（图 1-4）MSO 和 20μM 辛伐他汀对 hMPV 感染没有影响。然而，40μM 辛伐他汀导致 G光强度降低 13％，即辛伐他汀降低了病毒感染。进一步地，当补充外源性胆后，GFP 的降低率恢复至 8％，即辛伐他汀对病毒感染的抑制作用可被外源性醇部分逆转。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Lipid dysregulation in hepatitis C virus, and impact of statin therapy upon clinical outcomes[J]. Tracey G Simon,Adeel A Butt. World Journal of Gastroenterology. 2015(27)
本文编号：3139868
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
hMPV感染VeroE6细胞后GFP表达情况
图 1-2 辛伐他汀和外源性胆固醇对 hMPV 复制和释放的影响Figure 1-2 Effect of simvastain and exogenous cholesterol on hMPV replication andrelease in 16HBE cells2.3 辛伐他汀对 hMPV 胞吞入胞量的影响不同浓度辛伐他汀(20, 40μM) 37℃处理 16HBE 一小时后接入 MOI=10 的hMPV 后固定，间接免疫荧光染色，运用激光共聚焦显微技术观察 hMPV-N 蛋白的红色荧光在 16HBE 细胞内的分布情况。(A) 40μM 辛伐他汀处理后，16HBE 细胞内的 hMPV-N 红色荧光明显减少，补充 500μM 外源性胆固醇后，部分细胞内的hMPV-N 红色荧光增加；用 CTB（绿色荧光）标记脂筏。CTB 入胞量被辛伐他汀抑制，其抑制作用能被胆固醇逆转。(B) 统计 10 个细胞中 hMPV-N 红色荧光点数。(C) 统计 10 个细胞中的 CTB 平均荧光强度。
重庆医科大学硕士研究生学位论文.4 流式检测辛伐他汀对 hMPV-GFP 荧光阳性率的影响在构建过程中，绿色荧光蛋白（GFP）的基因被插入到 hMPV 的 F 基因质，因此实验所用的 hMPV 能发出绿色荧光，且绿色荧光阳性率可代表 hMPV率。使用流式细胞仪检测辛伐他汀对 hMPV-GFP 荧光阳性率的影响（图 1-4）MSO 和 20μM 辛伐他汀对 hMPV 感染没有影响。然而，40μM 辛伐他汀导致 G光强度降低 13％，即辛伐他汀降低了病毒感染。进一步地，当补充外源性胆后，GFP 的降低率恢复至 8％，即辛伐他汀对病毒感染的抑制作用可被外源性醇部分逆转。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Lipid dysregulation in hepatitis C virus, and impact of statin therapy upon clinical outcomes[J]. Tracey G Simon,Adeel A Butt. World Journal of Gastroenterology. 2015(27)
本文编号：3139868
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