不同分枝杆菌侵染对巨噬细胞免疫相关基因及microRNAs表达的影响

发布时间：2017-04-18 07:18

  本文关键词：不同分枝杆菌侵染对巨噬细胞免疫相关基因及microRNAs表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:结核病是结核分枝杆菌感染人体后引起的慢性感染性疾病。在结核病感染过程中,结核分枝杆菌会被巨噬细胞吞噬,并在其中存活、增殖,最终导致巨噬细胞的凋亡,进而引发结核病。可见,若要更好地预防和治疗结核病,就需要更深入的研究结核病的发病机制。本研究选取了与炎症作用相关的免疫基因及与其调控相关的microRNAs,通过观察巨噬细胞感染不同毒力的分枝杆菌后它们表达量的变化情况,探讨分枝杆菌的感染机制及不同毒力的分枝杆菌与侵染的关系,为进一步探究结核分枝杆菌与巨噬细胞的相互作用奠定基础。方法:本研究选用诱导分化的THP-1巨噬细胞,构建体外侵染模型,三种分枝杆菌H37Rv、H37Ra和BCG分别感染巨噬细胞12h、24h和36h后,收集细胞的总RNA并反转录成cDNA,采用实时荧光定量PCR的方法检测免疫相关基因IL-1、IL6R、RAB6B和TLR4的变化。根据预测miRNA靶基因的相关数据库筛选出有调控关系的三种miRNAs,即microRNA-21、microRNA-155和microRNA-29a,将收集的总RNA中miRNAs部分采用一步加尾法进行反转录成为cDNA,同样采用实时荧光定量PCR的方法检测它们表达量的变化情况。结果:1.H37Rv、H37Ra和BCG感染THP-1巨噬细胞12h,24h,36h后,通过Real-time PCR的方法检测到:IL-1和THR4表达量全部上调;RAB6B表达量全部下调;H37Rv感染组在处理12h时,IL6R表达量下调(P0.05),在感染后期表达量出现上调;并且在BCG感染组在处理12h时IL6R表达量显著上调(P0.05)。2.实时荧光定量PCR检测到,三种分枝杆菌处理组在12h、24h和36h收集的样品中,除12hBCG感染处理组microRNA-21下调以外,microRNA-21、microRNA-155和microRNA-29a表达量全部上调。BCG感染组在处理36h时,miRNA-21表达量显著上调(P0.05);H37Ra感染组处理24h时,miRNA-21和miRNA-29a表达量显著上调(P0.05)。结论:三种分枝杆菌H37Rv、H37Ra和BCG侵染巨噬细胞引起了免疫相关基因表达量发生变化;与目的基因相关的microRNA-21、microRNA-155和microRNA-29a的表达量均上调,除12hBCG感染处理组microRNA-21下调以外。
【关键词】：分枝杆菌 巨噬细胞 实时荧光定量 miRNA
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R52
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-8
• 第一篇 文献综述8-16
• 1 结核病8
• 2 巨噬细胞吞噬功能8-9
• 3 非编码RNA研究进展9-16
• 3.1 MicroRNAs的生物学功能9-10
• 3.2 MicroRNAs在疾病中的作用10-11
• 3.3 MicroRNAs研究前景与展望11
• 3.4 LncRNA的生物学功能11-13
• 3.5 LncRNA在人类疾病发生发展中的作用13-14
• 3.6 LncRNA的研究前景与展望14-16
• 第二篇 研究内容16-42
• 第一章 小鼠原代肺泡巨噬细胞的分离与THP-1 细胞的诱导分化16-23
• 1.1 材料与方法16-20
• 1.2 结果与分析20-21
• 1.3 讨论21-22
• 1.4 小结22-23
• 第二章 THP-1 巨噬细胞感染H37Rv，H37Ra和BCG后免疫相关基因的表达23-34
• 2.1 材料和方法23-28
• 2.2 结果与分析28-33
• 2.3 讨论33
• 2.4 小结33-34
• 第三章 THP-1 巨噬细胞感染H37Rv，H37Ra和BCG后microRNAs变化34-42
• 3.1 材料与方法34-36
• 3.2 结果与分析36-39
• 3.3 讨论39-41
• 3.4 小结41-42
• 结论42-43
• 参考文献43-48
• 附录48-49
• 作者简介49-50
• 致谢50

【共引文献】

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本文编号：314307