金属蛋白酶TRABD2A抑制HIV-1复制及机制研究

发布时间：2021-04-25 07:19

　　目的:人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus,HIV）是引起人类获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS）即艾滋病的主要病原体。HIV感染人体后,机体免疫功能严重缺损,常因合并严重的机会性感染而最终导致死亡。HIV病毒限制因子是指存在于宿主细胞内的抑制病毒复制的蛋白质,是机体防御病毒感染的第一道防线。现阶段已经发现了多种HIV病毒限制因子包括SAMHD1（SAM And HD Domain Containing Deoxynucleoside Triphosphate Triphosphohydrolase 1,SAMHD1）、APOBEC3G（apolipoprotein B-editing catalytic polypeptide 3G proteins,APOBEC3G）、TRIM5（tripartite motif-containing protein 5,TRIM5）和Tetherin（BST-2/CD317/HM1.24）等。HIV病毒限制因子的研究能够解释机体抵御病毒感染的... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 TRABD2A抑制HIV-1 病毒复制的研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要仪器和试剂
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验对象
        2.3 实验方法
            2.3.1 质粒转染
            2.3.2 病毒制备和感染
NL4.3-Luc（VSV-G）病毒包装">            2.3.3 HIV-1_NL4.3-Luc（VSV-G）病毒包装
            2.3.4 荧光素酶检测
            2.3.5 ELISA检测p24
            2.3.6 Real-timePCR
            2.3.7 病毒载量检测
            2.3.8 蛋白质免疫印迹
            2.3.9 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 TRABD2A能够有效地抑制HIV-1 病毒的复制
        3.2 TRABD2A的不同转录本的抗病毒功能
        3.3 TRABD2A对不同嗜性的HIV-1、HIV-2和SIV的抗病毒作用
        3.4 TRABD2A的抗病毒作用依赖其金属蛋白酶活性
    4 讨论
    5 结论
第二部分 TRABD2A抑制HIV-1 病毒复制的机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要仪器和试剂
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验对象
        2.3 实验方法
            2.3.1 质粒转染
            2.3.2 细胞膜蛋白提取
            2.3.3 蛋白质免疫印迹
            2.3.4 细胞免疫荧光
            2.3.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 TRABD2A降解HIV Gag蛋白,对Env蛋白没有影响
        3.2 TRABD2A在细胞膜上降解Gag进而抑制病毒在细胞膜上组装
    4 讨论
    5 结论
第三部分 内源性TRABD2A在 MDDCs中抑制HIV-1 病毒复制的研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要仪器和试剂
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验对象
        2.3 实验方法
            2.3.1 PBMC提取
            2.3.2 从PBMC中分选CD14+单核细胞
            2.3.3 MDDCs的诱导
            2.3.4 siRNA转染
AD8和HIV_89.6 病毒包装">            2.3.5 HIV_AD8和HIV_89.6 病毒包装
            2.3.6 sh RNA慢病毒及VLP-Vpx慢病毒包装及感染
            2.3.7 病毒多轮感染
            2.3.8 ELISA检测p24
            2.3.9 免疫荧光检测TRABD2A的表达
            2.3.10 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 TRABD2A在 MDDCs中有表达而在单核细胞中没有表达
        3.2 内源性TRABD2A抑制HIV病毒在MDDCs中复制
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3158962