干扰素诱导基因GPR171在病毒感染中的功能研究

发布时间：2021-05-20 06:32

　　病毒性疾病严重危害人类身体健康,据联合国艾滋病联合规划署和世界卫生组织最新数据统计,自1986年6月5日第一次确认艾滋病以来,艾滋病已造成2500多万人死亡。同时随着全球化进程加快,人员流动性增加,使得病毒的传播更为便捷。因此了解病毒的感染机制以及制定相应的治疗策略就显得尤为重要。干扰素作为机体在抵御病毒感染过程中重要的效应分子,对于病毒性疾病的治疗具有十分重要的意义。干扰素通过与干扰素受体结合,诱导下游300多种干扰素诱导基因的产生进而在病毒感染中发挥重要作用,但大部分干扰素诱导基因的功能仍处于未知状态。为此,本课题组分别采用重组人干扰素α和干扰素γ分别对人的外周血单个核细胞和小鼠骨髓来源巨噬细胞进行刺激,采用高通量RNA-seq技术筛查和评价245000个转录本中差异表达的基因,进而发现G蛋白偶联受体家族成员GPR171的表达显著升高。与此同时我们也发现GPR171的表达在病毒感染时也会明显上升。为了探究干扰素诱导GPR171表达的分子机制,我们采用干扰素受体封闭、干扰素受体下游JAK抑制剂处理发现均能显著抑制干扰素诱导的GPR171表达,表现出典型的干扰素诱导基因的特征。随后采用... 

【文章来源】：华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 研究背景
    1.病毒严重危害人类的生命健康
    2.干扰素和干扰素诱导基因在病毒感染中发挥重要作用
    3.干扰素相关信号通路受到机体的精确调控
    4.GPCR对于细胞内信号转导具有重要的调控作用
    5.GPCR在病毒感染中发挥重要作用
    6.GPR171目前的研究进展
    7.课题研究目的以及意义
第二章 实验材料与方法
    1.实验材料
        1.1.实验小鼠及细胞
        1.2.实验试剂
        1.3.实验器材及耗材
        1.4.试剂配制
        1.5.引物序列
    2.实验方法
        2.1.荧光定量PCR
        2.2.基因敲除技术（CRISPR/cas9）
        2.3.VSV病毒扩增
        2.4.病毒滴度检测
        2.5.免疫印迹法 (Western blot)
        2.6.小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）的提取
        2.7.小鼠腹腔来源巨噬细胞（PEM）的提取
        2.8.小鼠嗅球VSV感染模型
        2.9.小鼠腹腔VSV感染模型
        2.10.结晶紫染色
        2.11.L929上清的制备
        2.12.转染步骤
        2.13.GPR171-sh RNA的构建
    3.统计学分析
第三章．实验结果和讨论
    第一节. GPR171是干扰素诱导基因
        1.干扰素诱导GPR171的表达
        2.干扰素通过NF-κB信号通路诱导GPR171表达上调
        3.病毒感染促进了GPR171的表达
    第二节. 过表达GPR171及其配体Biglen促进病毒的复制
        1.过表达GPR171能促进VSV的复制
        2.过表达GPR171能促进HSV和NDV的复制
        3.GPR171配体Biglen促进病毒的复制
        4.干扰GPR171的表达下调VSV的复制
    第三节. GPR171敲除后病毒的复制减少
        1.CRISPR/cas9技术构建GPR171敲除小鼠
        2.巨噬细胞敲除GPR171降低病毒复制
        3.Biglen通过GPR171促进病毒的复制
        4.VSV腹腔感染模型中，GPR171敲除小鼠VSV的表达量减少
        5.VSV嗅球感染模型中，GPR171敲除的小鼠嗅球中的VSV量明显减少
    第四节. GPR171通过影响干扰素信号通路来促进病毒的复制
        1.GPR171不影响干扰素的表达
        2.GPR171通过抑制干扰素下游的干扰素诱导基因的表达来达到促进病毒复制
    第五节：结论与展望
附录Ⅰ 缩略词
附录Ⅱ 攻读硕士学位期间科研工作成果
    科研工作成果
参考文献
致谢



本文编号：3197274