CD45异构体对HIV-1 gp120蛋白介导T细胞凋亡的影响携带GFP的SIV病毒株构建

发布时间：2021-08-23 15:32

　　HIV感染可通过多种机制引起机体内T细胞凋亡,其中,病毒的编码蛋白可以根据其在靶细胞内的表达水平调节细胞凋亡。gp120蛋白作为HIV包膜蛋白的主要组成部分,既可以在细胞外与细胞表面的CD4分子结合导致靶细胞和旁观者细胞凋亡,又可以在细胞内上调Fas、FasL、TNF-α、TRAIL受体DR4和DR5的表达诱导细胞凋亡,还可以使细胞滞留在G2期导致胞内ROS升高促进凋亡。研究显示,CD45分子在HIV-1 gp120蛋白介导的CD4+T细胞凋亡中发挥调节作用,在gp120蛋白的作用下,CD45分子通过调节FasL的表达参与细胞凋亡。作为I型跨膜糖蛋白,CD45分子主要以CD45RABC、CD45RO、CD45RA、CD45RB和CD45RC等异构体形式表达于淋巴细胞,其胞外结构域糖基化形式的差异对CD45异构体活性和功能具有重要影响。目前,CD45异构体在HIV感染引起的细胞凋亡方面研究甚少,为加深对CD45异构体在细胞凋亡过程中作用的理解,本研究通过构建稳定表达CD45异构体的细胞系,比较了CD45异构体在调节gp120蛋白介导的CD4+T细胞凋亡过程中的差异,并进一步分析了其下游分... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１流式检测ＣＤ４５在Ｍ５．０１和Ｊｕｒｋａｔ细胞表面表达情况??

细胞作为实验组，孵育４８ｈ后，流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果显示，ｇｐｌ２０、??Ｂ１２或ＣＤ３抗体单独处理并不能引起两种细胞凋亡，ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２?／?ＣＤ３抗体共同??处理组的Ｊｕｒｋａｔ细胞发生明显凋亡，而该组的Ｊ４５．０１细胞并未发生明显凋亡。图２Ａ??中展示的为ＣＤ３抗体单独处理组和ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２?／?ＣＤ３抗体共同处理组的细胞凋亡??情况，从图中可以看出，Ｊｕｒｋａｔ细胞发生较明显的凋亡。三次独立重复实验后，经??统计学分析可知，与对照组相比，ＣＤ３抗体单独处理组不能引发细胞凋亡，ｇｐｌ２０??／８１２复合物处理过的凋亡率为１４％±０．５６，』４５．０１凋亡率为６％±０．４８，见图２８。??根据ＣＤ３抗体的促Ｔ细胞活化作用可知，在这个使用浓度下ＣＤ３抗体不引起细胞??凋亡，研究显示，ＣＤ３抗体可通过细胞活化促进ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２复合物诱导．ｈｉｒｋａｔ细??胞凋亡，在此情况下，Ｊ４５．０１细胞由于缺失ＣＤ４５分子而不发生凋亡，因此ＣＤ４５??分子可调节ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２复合物介导的Ｔ细胞凋亡。??Ａ??ｍ?ａｎｔｉ－ＣＤ３?ｇｐｌ２０／Ｂ１２／ａｎｔｉ－ＣＤ３??Ｉ?０．?５９?Ｉ?０．７５??Ｉ?５．２１?ＨＴ８??ｉ￣?：——ｗｔｉ?ＪＥ６＊１??ｓ?１零?Ｐ??％?…－一ｎ??ｒｉ?１?Ｉ?０．?７６?？?｜?０．７８??｝?１１．?３〇！?１?Ｉ?４．２１??１?１??！￣￣—］￣￣＾｜ｒ￣１Ｊ４５－０１??ｉ?ｉ??Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ??２１??

亡可能其浓度有关，于是我们分别用ＯｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭ和１００ｎＭ的ｇｐｌ２０??／?Ｂ１２复合物浓度处理．ｌｕｒｋａｔ，孵育４８ｈ后检测细胞的凋亡率，根据实验数据绘制??折线图，如图３所示，随着ｇｐｌ２０／Ｂ１２复合物浓度的增加，细胞凋亡率也随之升??高，在浓度为１００ｎＭ时，细胞凋亡率为１５％左右，说明在一定范围内凋亡过程是??剂量依赖性的，ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２复合物的浓度决定了细胞凋亡的程度。??２５－??２０－?Ｔ??ｔ?」??Ｕ）?１５－?１??〇?Ｔ〇?ｒ５〇?ｎＭ??ｇｐｌ２０／Ｂ１２复合物浓度??图３不同浓度ｇｐｌ２０?／?Ｂ１２复合物对细胞凋亡的影响??Ｆｉｇ．３?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｇｐｌ２０／Ｂ１２?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｎ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?Ｊｕｒｋａｔ??２２??


本文编号：3358133