核酸序列依赖扩增技术检测隐球菌的方法建立和评价

发布时间：2021-08-28 06:13

　　目的:建立核酸序列依赖扩增技术（NASBA）检测隐球菌RNA的方法,提高隐球菌感染诊断的准确性。方法:设计一对具有隐球菌属特异性的引物,构建NASBA扩增隐球菌RNA的方法并评价该方法的灵敏度和特异性。按欧洲癌症研究和治疗组织/侵袭性真菌感染协作组和美国变态反应和感染病研究院真菌病研究组（EORTC/MSG）2008年修订的侵袭性真菌病定义标准收集隐球菌感染的阳性病例和排除隐球菌感染的阴性病例,分别应用隐球菌荚膜多糖抗原检测（胶体金法）、PCR及本研究建立的NASBA方法进行检测。应用配对诊断试验设计、McNemar检验分别对3种方法进行比较以评价其诊断效能。结果:NASBA产物电泳结果显示仅新型隐球菌RNA扩增产物出现了特异性条带,而其他对照菌（烟曲霉、串珠镰刀菌、金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、近平滑念珠菌）均没有出现电泳条带;NASBA结合电泳检测结果表明该方法灵敏度可达10 cfu/mL。NASBA、荚膜多糖抗原胶体金法及PCR灵敏度分别是87.5%（95%CI=66.53%～96.71%）、100%（95%CI=82.83%～100%）、66.67%（95... 

【文章来源】：重庆医科大学学报. 2020,45(06)北大核心CSCD

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【部分图文】：

不同菌种NASBA扩增后电泳结果

NASBA扩增106 cfu/mL、105 cfu/mL、104 cfu/mL浓度隐球菌孢子数菌悬液提取的RNA，及其倍比稀释后的相当于孢子浓度分别为103 cfu/m L、102 cfu/m L、101 cfu/m L和100 cfu/m L的RNA，经电泳方法检测结果发现RNA对应的孢子浓度为10 cfu/mL仍有阳性条带，推断该方法灵敏度可达10 cfu/mL（图3）。2.4 NABSA检测的性能评价

NASBA扩增产物的凝胶电泳结果表明，新型隐球菌RNA扩增出约229 bp的片段，阴性对照无特异性的扩增片段。扩增产物RNA基因测序结果经BLAST站点进行序列比对，与新型隐球菌标准菌株H99的CAP10序列一致（图1）。2.2 特异性分析


本文编号：3367967