宿主蛋白Musashi-2在H7N9禽流感病毒感染中的作用及相关机制研究
发布时间：2021-09-16 23:46
H7N9禽流感病毒感染自从2013年春季爆发以来,已有5波流行病学爆发的报道,导致近1500多例感染报道,死亡人数达500多例,给人们的生命财产带来了严重的威胁。相关研究表明,禽类贸易和活禽市场体系是H7N9禽流感病毒感染持续爆发的主要原因之一。H7N9禽流感病毒为新型重组病毒,其中血凝素HA（Hemagglutinin）来自于家鸭携带的H7N3流感病毒,神经氨酸酶NA（Neuraminidase）来自于野生鸟类携带的H7N9流感病毒,其余重组基因来自于家禽携带的H9N2流感病毒。H7N9禽流感病毒感染人体后,可以导致全身炎症反应,出现呼吸窘迫综合征（ARDS）、休克以及多脏器功能衰竭等严重症状。因此,深入研究并揭示H7N9禽流感病毒导致的临床病毒性并发症的发病机制,对于H7N9禽流感病毒感染的预防、诊断和治疗具有重要意义。宿主天然免疫系统是机体在长期进化过程中形成的可以抵抗病原微生物感染的防御机制,也是机体接收外界病原微生物感染信号以及清除病原体的“第一道防线”。在病毒感染机体时,宿主细胞通过不同的模式受体PRRs（Pattern Recognition Receptors）来识别病...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
英文摘要
缩略词表
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验细胞与病毒
1.1.2 主要仪器设备
1.1.3 主要试剂
1.2 实验方法
1.2.1 细胞培养
1.2.2 细胞RNA提取及qRT-PCR
1.2.3 琼脂糖凝胶电泳实验
1.2.4 流感病毒三种形式RNA检测
1.2.5 蛋白免疫印迹Western blot
1.2.6 免疫共沉淀实验
1.2.7 H7N9禽流感病毒扩增及病毒滴度TCID_(50)的测定
1.2.8 H7N9禽流感病毒感染细胞
1.2.9 细胞MSI2 small- interfering RNA转染
1.2.10 细胞MSI-2过表达质粒转染
1.2.11 细胞慢病毒介导的MSI2 shRNA转染
1.2.12 细胞siRNA/shRNA干扰后细胞活性检测CCK-8实验
1.2.13 酶联免疫吸附实验ELISA
1.2.14 胞核蛋白/胞浆蛋白抽提实验
1.2.15 激光共聚焦实验
1.2.16 统计分析
2 结果
2.1 Musashi-2在H7N9禽流感病毒感染中的抗病毒作用
2.1.1 H7N9禽流感病毒下调宿主蛋白Musashi-2表达
2.1.2 Musashi-2敲减促进H7N9禽流感病毒感染
2.1.3 Musashi-2过表达抑制H7N9禽流感病毒感染
2.2 Musashi-2在H7N9禽流感病毒介导的固有免疫应答中的作用及分子机制研究
2.2.1 敲减Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒介导的相关细胞因子的表达
2.2.2 敲减Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒介导的IFN-β的表达
2.2.3 过表达Musashi-2促进H7N9禽流感病毒介导的固有免疫信号通路分子激活
2.2.4 敲减Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒介导的IRF-3和NF-κBp65磷酸化水平
2.2.5 Musashi-2促进转录因子IRF-3和NF-κB核转移
2.2.6 敲减Musashi-2抑制JAK-STAT信号通路激活
2.3 Musashi-2通过阻止H7N9禽流感病毒NP蛋白核输入抑制病毒复制
2.3.1 Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒的转录,复制作用
2.3.2 Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒NP蛋白核输入
2.3.3 Musashi-2与H7N9禽流感病毒NP蛋白在细胞内的共定位
2.3.4 Musashi-2与H7N9禽流感病毒NP蛋白相互作用
2.3.5 Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒NP核输入
分析与讨论
结论
参考文献
综述
参考文献
作者简历及在读期间所取得的科研成果
本文编号：3397518
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
英文摘要
缩略词表
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验细胞与病毒
1.1.2 主要仪器设备
1.1.3 主要试剂
1.2 实验方法
1.2.1 细胞培养
1.2.2 细胞RNA提取及qRT-PCR
1.2.3 琼脂糖凝胶电泳实验
1.2.4 流感病毒三种形式RNA检测
1.2.5 蛋白免疫印迹Western blot
1.2.6 免疫共沉淀实验
1.2.7 H7N9禽流感病毒扩增及病毒滴度TCID_(50)的测定
1.2.8 H7N9禽流感病毒感染细胞
1.2.9 细胞MSI2 small- interfering RNA转染
1.2.10 细胞MSI-2过表达质粒转染
1.2.11 细胞慢病毒介导的MSI2 shRNA转染
1.2.12 细胞siRNA/shRNA干扰后细胞活性检测CCK-8实验
1.2.13 酶联免疫吸附实验ELISA
1.2.14 胞核蛋白/胞浆蛋白抽提实验
1.2.15 激光共聚焦实验
1.2.16 统计分析
2 结果
2.1 Musashi-2在H7N9禽流感病毒感染中的抗病毒作用
2.1.1 H7N9禽流感病毒下调宿主蛋白Musashi-2表达
2.1.2 Musashi-2敲减促进H7N9禽流感病毒感染
2.1.3 Musashi-2过表达抑制H7N9禽流感病毒感染
2.2 Musashi-2在H7N9禽流感病毒介导的固有免疫应答中的作用及分子机制研究
2.2.1 敲减Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒介导的相关细胞因子的表达
2.2.2 敲减Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒介导的IFN-β的表达
2.2.3 过表达Musashi-2促进H7N9禽流感病毒介导的固有免疫信号通路分子激活
2.2.4 敲减Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒介导的IRF-3和NF-κBp65磷酸化水平
2.2.5 Musashi-2促进转录因子IRF-3和NF-κB核转移
2.2.6 敲减Musashi-2抑制JAK-STAT信号通路激活
2.3 Musashi-2通过阻止H7N9禽流感病毒NP蛋白核输入抑制病毒复制
2.3.1 Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒的转录,复制作用
2.3.2 Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒NP蛋白核输入
2.3.3 Musashi-2与H7N9禽流感病毒NP蛋白在细胞内的共定位
2.3.4 Musashi-2与H7N9禽流感病毒NP蛋白相互作用
2.3.5 Musashi-2抑制H7N9禽流感病毒NP核输入
分析与讨论
结论
参考文献
综述
参考文献
作者简历及在读期间所取得的科研成果
本文编号：3397518
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