利用CRISPR/Cas9构建Hutat2:Fc基因敲入的单核细胞及其抗HIV-Tat神经毒性作用的实验研究

发布时间：2021-10-06 19:50

　　研究背景和目的:随着高效抗反转录抗病毒治疗（highly active antiretroviral therapy,HAART）的广泛应用,人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）感染已经由一种快速致死性疾病逐渐变为一种慢性可控性疾病。由于患者生存时间的延长和生存质量的提高,HIV-1感染引起的并发症受到越来越多的关注。其中,HIV相关神经认知功能紊乱（HIV-associated neurocognitive disorder,HAND）的发病率逐年提高。在导致HAND发病的各种因素中,HIV-1反式激活因子（transactivator of transcription,Tat）起着至关重要的作用:一方面,HIV-Tat可以直接在引起中枢神经系统神经元和胶质细胞的炎症损伤,另一方面,HIV-Tat可以激活HIV病毒的转录和翻译,从而加速病毒扩散和疾病进程。因此,中和脑内的HIV-Tat对于HAND的治疗具有重要意义。人源化抗Tat单抗与Fc融合蛋白（humanized anti-HIV-Tat2 scFv:Fc fusion protei... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：108 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HAND研究进展的时间分布示意图从1981AIDS被发现以来，在HAND的发病机制和临床治疗方面的主要研究成果[7]

HAND的分类 接受HAART的病人中发病率 诊断标准无症状神经认知功能损伤（ANI）30% 神经功能损伤超过2个神经认知领域（大于正常人评分的一个标准差）；不影响日常功能和生活轻度神经认知功能紊乱（MND）20%-30% 神经功能损伤超过2个神经认知领域（大于正常人评分的一个标准差）；轻度日常功能和生活HIV相关痴呆（HAD） 2%-8% 神经功能损伤超过2个神经认知领域（大于正常人评分的两个标准差）；严重日常功能和生活

端（double stranded breaks, DSB），在无外源同源修复模板时，通过易错的非同源末端连接（nonhomologous end-joining, NHEJ）的方式进行修复，但这种修复往往会局部引起插入或缺失突变[161]（图4）。图4 基因编辑技术的工作原理 A是对体内的基因位点切割形成断端后，基因组的修复机制；B是ZFN和TALEN的工作原理；C是CRISPR/Cas9的工作原理[159]目前有3类技术能够在基因组上的特定位点实现有效的DSB，分别是酵母中发现一种转录因子——锌指核酶（zinc-finger nuclease, ZFN）；黄单胞菌中发现的转录激活样效应因子核酶（transcription activator-like effector nuclease, TALEN）；以及最近刚刚发现的从II型细菌适应性免疫系统中逐渐发现的CRISPR/Cas9（图4）。CRISPR/Cas9技术具有广泛的应用前景，它可以用于各种各样的靶向基因工程。野生型Cas9核酸酶可以在很多传统技术难以实现细胞和动物中实现基因编辑，仅仅设计一个23bp组成的靶向RNA序列（single guide RNA, sgRNA）就可以实现单位点或多位点的基因切割、动物模型的构建、功能性基因的筛选、转录调控、表观遗传学控制和细胞内的活体成像（图5）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年10月全国艾滋病性病疫情[J]. NCAIDS,NCSTD,China CDC;.  中国艾滋病性病. 2017(12)



本文编号：3420637