含内参的登革病毒与基孔肯雅病毒3重荧光定量PCR检测方法的建立与评估

发布时间：2017-05-04 01:09

  本文关键词：含内参的登革病毒与基孔肯雅病毒3重荧光定量PCR检测方法的建立与评估，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的建立一种含内参的,针对登革病毒和基孔肯雅病毒核酸检测的3重荧光定量PCR方法。方法针对登革病毒3'端非结构蛋白编码区和基孔肯雅病毒5'端非结构蛋白编码区设计引物与探针,建立一套含有内参的并且能同时检测登革病毒和基孔肯雅病毒的3重实时荧光定量RT-PCR方法。对其最低检测限和特异度进行验证,通过检测血清标本对该方法进行临床应用评估。结果建立的3重荧光定量PCR登革病毒与基孔肯雅病毒绝对定量标准曲线显示,病毒拷贝数的对数值与CT值之间具有良好的线性关系,梯度稀释后的标准品核酸检测均呈现典型的S型曲线。检测日本脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、辛德毕斯病毒各1株,结果均为阴性,特异度为100%。用该方法检测294份登革热患者血清,灵敏度为100%,特异度为89.3%,阳性预测值为92.1%,阴性预测值为100%;测定33份基孔肯雅热病患者血清的灵敏度、特异度及阴、阳性预测值均为100%。结论建立的含有内参的能同时检测登革病毒与基孔肯雅病毒的3重荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度和特异度,可用于登革病毒与基孔肯雅病毒感染检测,为早期筛查和鉴别登革病毒和基孔肯雅病毒感染提供依据。
【作者单位】： 南方医科大学公共卫生与热带医学学院;广东省疾病预防控制中心;佛山市疾病预防控制中心;上海之江生物科技股份有限公司;
【关键词】： 重荧光定量RT-PCR 登革病毒 基孔肯雅病毒
【基金】：实验室感染性材料溯源和生物风险溯源关键技术和产品研究项目(No.2014AA021404)
【分类号】：R373.33
【正文快照】： ***登革病毒(dengue virus,DENV)属于黄病毒科,黄病毒属,基因组为单股正链RNA,可分为DENVⅠ、DENVⅡ、DENVⅢ、DENVⅣ4种血清型,各型之间存在一定的交叉反应[1]。登革病毒感染引起登革热(DF)、登革出血热(DHF)及登革休克综合征(DSS)。基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)属

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10 张海林,米竹青,施华芳,自登云;树

本文编号：344108