中国仓鼠卵巢细胞中稳定表达发热伴血小板减少综合征病毒样颗粒新方法的研究

发布时间：2021-10-23 11:47

　　为了探索发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV）样颗粒的高效表达方法,本研究根据布尼亚病毒装配成熟的机制,建立SFTS病毒包膜糖蛋白和核蛋白融合表达质粒,并在表达载体中引入荧光蛋白报告基因,转染中国仓鼠卵巢细胞,传代培养两代后,根据荧光蛋白表达水平,采用有限稀释法,在荧光显微镜下,人工挑选细胞集落,建立病毒样颗粒稳定表达细胞系,并通过荧光蛋白表达水平的变化,评价细胞系的稳定性,采用间接免疫荧光、免疫印迹和电子显微镜对病毒样颗粒进行分析鉴定。结果显示,融合表达的包膜糖蛋白和核蛋白可在细胞内装配形成病毒样颗粒并分泌到胞外,在无选择压力条件下筛选的细胞系能够在较长时间内保持稳定,传代40次后报告基因表达水平无明显变化。本研究显示了通过病毒结构蛋白基因的修饰,可以改进病毒样颗粒制备方法,为相关生物制品的生产技术研究提供了重要线索。 

【文章来源】：病毒学报. 2015,31(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
材料与方法
    1细胞,毒株,载体和抗体
    2基因分离和表达质粒构建
    3转染与细胞克隆筛选
    4间接免疫荧光
    5细胞系荧光稳定性监测
    6 VLPs制备与纯化
    7 SDS-PAGE与免疫印迹试验
    8透射电镜观察
结果
    1表达质粒构建
    2细胞系建立与初步鉴定
    3 VLPs制备与鉴定
讨论



本文编号：3453131