G-四联体/氧化石墨烯检测微平台的构筑及其在肺炎支原体分子诊断中的研究

发布时间：2021-11-04 04:46

　　目的:肺炎支原体是引起呼吸道感染的常见的病原菌,此外,它也是大多数社区获得性肺炎患者的主要致病菌之一。由该致病菌导致的机体发病率在最近几年显著升高。在中国,肺炎支原体感染发生率超过15%,部分省份情况更为严重,高达20%-30%,极大影响了人们的生活质量和生命健康。虽然目前肺炎支原体的诊断方法种类繁多,但是由于它感染机体后引起的临床症状并不具有特征性,加之临床上缺乏早期有效的诊断方法,因而发展一种快速、简便、低成本的检测方法对提高治愈率,减少过度使用抗生素和减轻病人的痛苦及其经济压力起着至关重要的作用。本研究基于检测物肺炎支原体的特异性DNA序列与G6-P荧光探针的特异性结合以及氧化石墨烯的荧光淬灭效应,从而实现肺炎支原体DNA的快速检测。方法:本研究引入了一种标记荧光的探针链,该探针的5’端可以共聚生成G-四联体,而3’末端连有FAM荧光素,并且靠近3’端的DNA序列可以和目标物肺炎支原体的DNA特异性结合。在没有目标物肺炎支原体DNA存在的情况下,G-四联体游离的单链DNA部分能够被氧化石墨烯所吸附,几乎所有的荧光被氧化石墨烯淬灭,当体系中加入肺炎支原体DNA后,DNA能够和G-四... 

【文章来源】：海南医学院海南省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

G-四联体/GO检测微平台的构筑及其在肺炎支原体分子诊断中的研究

-G4 荧光探针形成示，条带 1，2，3，4 分别为终浓度为 2.5 μM 的 G6-P 荧光探针，从图中可以看出，G6-P，G5-P，G4-P 和一条低分子条带，但是只有 G6-P，G5-P，G4-P 可以 G6-P，G5-P，G4-P 形成了 TP-G4 荧光探针结构，而荧光探针结构。此外，我们发现随着 G 碱基数量的增明 TP-G4 荧光探针的形成效率也更高。光探针与目标物肺炎支原体 DNA 反应，7，8 分别为终浓度为 2.5 μM 的 G6-P，G5-P，G4-P物质的量的目标肺炎支原体 DNA 反应结果，从图中G6-P，G5-P，G4-P 均可以和目标肺炎支原体 DNA 反量的增加，聚合物条带更亮，这也表明 TP-G4 荧光探从而结合效率也随之增加。

色谱TP-G4 形成 基于不同的卷绕方向可以分为平行结构和反平行结构，D 光谱在 264 nm 处有正峰，在 240 nm 处为负峰，而反平 290nm 处有正峰，在 260nm 处为负峰。如图 3-2 所示，G 处呈现阳性峰，这是单链 DNA 典型的 CD 谱特征。而 G 谱在 270 nm 处出现了阳性峰，在 240 nm 处出现了负峰行结构的 TP-G4 的 CD 谱。但是当我们用 G4-P、G5-P、 G0-P 的 CD 谱时，可以分别得到一个 CD 谱：在 264 n处为负峰。该峰为典型的平行结构的 TP-G4 的 CD 谱，由G6-P 形成了 TP-G4 荧光探针结构，测的 CD 谱在 270 nm由于 3’端单链缘故，导致阳峰的位置出现了部分的向右


本文编号：3475032