血浆外泌体来源的miRNA-323a-3p作为结核病潜在生物标志物的评估

发布时间：2021-11-16 06:00

　　目的·研究血浆外泌体来源的microRNA（miRNA）,为结核病的诊断寻找潜在标志物。方法·采用卡介苗（Bacille CalmetteGuérin,BCG,即减毒牛分枝结核杆菌）感染人单核细胞白血病细胞（THP-1）来源的巨噬细胞（BCG组）,设置未感染细胞为对照组。利用超速离心法获取2组细胞培养上清液中的外泌体,通过透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM）、蛋白质印迹法进行形态学及蛋白标志物鉴定,并对外泌体进行转录组测序分析。选取测序结果中的3个差异表达miRNAs,就10例结核病患者（结核病组）和8例健康志愿者（健康对照组）的血浆外泌体进行临床验证。通过TargetScan、miRDB和PicTar数据库对存在潜在差异表达的miRNA进行靶基因预测。结果·细胞培养上清液外泌体测序结果显示,与对照组相比,miRNA-323a-3p、miRNA-29a-3p和miRNA-29b-3p在BCG组的表达均有显著差异,而在临床验证中仅有miRNA-323a-3p在2组表达间的差异具有统计学意义（P=0.004）;且miRNA-323a-3... 

【文章来源】：上海交通大学学报(医学版). 2020,40(02)北大核心CSCD

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【部分图文】：

不同因素诱导的THP-1细胞形态（×40)

外泌体的TEM观察

外泌体内含有多种特异性蛋白，如CD81、CD63、CD9、TSG101等。本研究采用Western blotting对外泌体特异性蛋白CD9及TSG101进行验证，以β-actin作为内参。通过对超速离心法获取的沉淀进行检测发现，外泌体特征性蛋白高表达，同时也进一步说明所提取样本为外泌体（图3）。2.4 细胞培养上清液外泌体转录组测序分析


本文编号：3498289