衣原体噬菌体CPG1衣壳蛋白Vp1对沙眼衣原体抑制作用机制的研究
发布时间：2021-11-16 10:24
【背景】沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,C.t）泌尿生殖道感染是近年来国内外最常见的性传播疾病,大约2/3的C.t感染者没有症状,但感染可持续存在并引起一系列严重的并发症,例如:女性的盆腔炎、异位妊娠和输卵管性不孕,男性的尿道炎、附睾炎等。症状的隐匿性更增加了感染在人群中传播的机率。由于C.t特殊的生物学特性,抗生素的治疗效果并不令人满意,迄今为止尚无具有有效免疫保护作用的疫苗。C.t是国际公认的威胁人类公共健康的难题。抗生素可扰乱人体内正常菌群并造成耐药菌群的传播,针对特定致病菌而不影响其它菌群的精准的生物治疗是目前国际追求的最理想的目标,但迄今为止尚无。严峻的微生物耐药形势促使我们探索和建立新的有效的研发机制和具体方法,或许可以在一定程度上可以为未满足的临床需要提供有价值的治疗选择。我们前期发现Chlamydia virus CPG1衣壳蛋白Vp1对沙眼衣原体有明显的抑制/破坏效应,抑制率可达65%-92%,该效应已在沙眼衣原体小鼠生殖道感染模型中得到验证,并且该蛋白对其他生殖道常见菌没有抑制作用。这可能是噬菌体对其相应宿主产生抑制/破坏作用的新机制。【目的...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
噬菌体发现之后100年内的大事件（参考自：SalmondGPandFineranPC,NatRevMicrobiol.2015）
1.加入与一抗对应的二抗稀释液，同时加入 hoechst 稀释液染细胞核。37℃孵h。2.加入 PBS 溶液洗 3 次，每次 5 min，水平振荡器上面振荡。3.将玻片小心夹起，用去离子水洗一下，用吸水纸将玻片上面的水小心吸干意不要碰到细胞。4.滴少许封片剂在载玻片上，将玻片的细胞面朝下，盖在封片剂上面。5.荧光显微镜观察并拍照。若不直接观察，可将样本放于 4 ℃冰箱保存。1.2 结果.2.1 Vp1 蛋白的表达与纯化转化 E.coli BL-21 后的 Vp1/Pet30a(+)重组质粒，经 IPTG 大量诱导表达 H签标记的 Vp1 蛋白，经 SDS-PAGE 检测，考马斯亮兰染色后可观察到在重粒蛋白沉淀中于相对分子量约 72 kDa 的位置有一明显条带（见图 2A），即表达的 Vp1 蛋白。回收纯化后的 Vp1 蛋白用 SDS-PAG 检测，在相对分子 72 kDa 处有一条唯一的蛋白条带（见图 2 B）。
津医科大学博士学位论文 一、Vp1 对沙眼衣原体抑制作用的研白表达量很高。（B） 诱导表达的蛋白经过柱纯化后，SDS-PAGE 检测，在分子量 70 kDa 附近有一条唯一的条带。说明杂蛋白被移除，Vp1 被纯化。.2.2 Vp1 蛋白的浓度测定采用 BCA 法测定纯化后的 Vp1 蛋白的浓度（图 3）。先根据各浓度标准 562 nm 处的吸光值绘制出标准曲线（见表 6）。测得待测 Vp1 蛋白溶液在 5m 处的吸光度为 0.426，根据标准曲线公式，计算出纯化后 Vp1 蛋白的浓度48.2 μg/mL。表 6: 各浓度标准品在 562 nm 处的吸光值准品浓度 2000 1500 1000 750 500 250 125 25 0OD 值 1.287 1.055 0.7 0.611 0.483 0.304 0.238 0.158 0.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Biological Effects of Chlamydiaphage phi CPG1 Capsid Protein Vp1 on Chlamydia Trachomatis In Vitro and In Vivo[J]. 王生,郭睿,郭媛丽,邵丽丽,刘洋,魏世娟,刘原君,刘全忠. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2017(01)
[2]衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构分析及分段克隆表达[J]. 周全,刘原君,孙长贵,郭媛丽,马璟玥,郑蕾,刘全忠. 中国皮肤性病学杂志. 2016(05)
[3]衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1在D型沙眼衣原体外膜中结合位点的检测[J]. 刘原君,孙毅娜,姚卫锋,李燕,李卓然,卫酒荣,刘全忠. 中华传染病杂志. 2012 (10)
本文编号：3498698
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
噬菌体发现之后100年内的大事件（参考自：SalmondGPandFineranPC,NatRevMicrobiol.2015）
1.加入与一抗对应的二抗稀释液，同时加入 hoechst 稀释液染细胞核。37℃孵h。2.加入 PBS 溶液洗 3 次，每次 5 min，水平振荡器上面振荡。3.将玻片小心夹起，用去离子水洗一下，用吸水纸将玻片上面的水小心吸干意不要碰到细胞。4.滴少许封片剂在载玻片上，将玻片的细胞面朝下，盖在封片剂上面。5.荧光显微镜观察并拍照。若不直接观察，可将样本放于 4 ℃冰箱保存。1.2 结果.2.1 Vp1 蛋白的表达与纯化转化 E.coli BL-21 后的 Vp1/Pet30a(+)重组质粒，经 IPTG 大量诱导表达 H签标记的 Vp1 蛋白，经 SDS-PAGE 检测，考马斯亮兰染色后可观察到在重粒蛋白沉淀中于相对分子量约 72 kDa 的位置有一明显条带（见图 2A），即表达的 Vp1 蛋白。回收纯化后的 Vp1 蛋白用 SDS-PAG 检测，在相对分子 72 kDa 处有一条唯一的蛋白条带（见图 2 B）。
津医科大学博士学位论文 一、Vp1 对沙眼衣原体抑制作用的研白表达量很高。（B） 诱导表达的蛋白经过柱纯化后，SDS-PAGE 检测，在分子量 70 kDa 附近有一条唯一的条带。说明杂蛋白被移除，Vp1 被纯化。.2.2 Vp1 蛋白的浓度测定采用 BCA 法测定纯化后的 Vp1 蛋白的浓度（图 3）。先根据各浓度标准 562 nm 处的吸光值绘制出标准曲线（见表 6）。测得待测 Vp1 蛋白溶液在 5m 处的吸光度为 0.426，根据标准曲线公式，计算出纯化后 Vp1 蛋白的浓度48.2 μg/mL。表 6: 各浓度标准品在 562 nm 处的吸光值准品浓度 2000 1500 1000 750 500 250 125 25 0OD 值 1.287 1.055 0.7 0.611 0.483 0.304 0.238 0.158 0.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Biological Effects of Chlamydiaphage phi CPG1 Capsid Protein Vp1 on Chlamydia Trachomatis In Vitro and In Vivo[J]. 王生,郭睿,郭媛丽,邵丽丽,刘洋,魏世娟,刘原君,刘全忠. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2017(01)
[2]衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构分析及分段克隆表达[J]. 周全,刘原君,孙长贵,郭媛丽,马璟玥,郑蕾,刘全忠. 中国皮肤性病学杂志. 2016(05)
[3]衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1在D型沙眼衣原体外膜中结合位点的检测[J]. 刘原君,孙毅娜,姚卫锋,李燕,李卓然,卫酒荣,刘全忠. 中华传染病杂志. 2012 (10)
本文编号：3498698
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