ERK抑制剂PD98059对泡状棘球蚴原头节生长的影响

发布时间：2017-05-08 14:14

  本文关键词：ERK抑制剂PD98059对泡状棘球蚴原头节生长的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究以体外培养的泡状棘球蚴原头节为研究对象,将不同浓度的ERK抑制剂PD98059体外作用于泡状棘球蚴原头节,探讨ERK抑制剂PD98059体外对泡状棘球蚴原头节的作用。方法:麻醉已接种泡状棘球蚴原头节混悬液4-6个月的长爪沙鼠,断颈处死,在无菌条件下解剖,取出完整的泡状棘球蚴组织团块,用PBS清洗组织块3-5遍,研磨过滤,收集过滤液于无菌离心管中,静置5分钟,弃上清后用PBS洗涤原头节多次至澄清,用生理盐水制成泡状棘球蚴原头节混悬液经腹腔注射接种于仓鼠以制备种鼠,培养4个月后在无菌条件下解剖,取组织块经匀浆器研磨,滤筛过滤收集原头节,用含10%胎牛血清及双抗(100U/m L青霉素,链霉素100U/m L)的DMEM培养基进行体外培养,10d后,将不同浓度PD98059(0,6.25、12.5、25、50μmol/L)分别加入泡状棘球蚴原头节中进行体外培养。每组加入泡状棘球蚴原头节约2000个。不同浓度PD98059作用不同时间,通过伊红染色,在光镜下观察原头节的活力,计数并计算原头节存活率,实验重复三次,绘制原头节活力曲线;透射电子显微镜下观察原头节超微结构改变;用Western blot检测原头节p-ERK蛋白表达水平;用Caspase-3活性检测试剂盒检测原头节内caspase-3酶活性;TUNEL检测试剂盒检测PD98059作用后原头节体内的凋亡状况。结果:在整个实验过程中,DMSO对照组泡状棘球蚴原头节的活力变化不大,在第14天其活力为85±0.124%,而将不同浓度PD98059作用于泡状棘球蚴原头节6d后,通过伊红染色方法测得6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L组泡状棘球蚴原头节的活力分别为53.93±0.082%、51.69±0.297%、38.18±0.254%、28.21±0.241%;连续观察,在第14d,6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L PD98059组泡状棘球蚴原头节的活力分别仅为25.48±0.271%、20.1±0.092%、12.17±0.197%,50μmol/LPD98059组杀伤作用最为明显,泡状棘球蚴原头节的活力为0.53±0.012%。由此证实随着PD98059作用时间的延长和浓度的增加,PD98059对原头节的生长抑制作用越明显,具有时间依赖性和剂量依赖性。透射电子显微镜下观察发现,DMSO组泡状棘球蚴原头节合胞体带结构相对较致密,其内囊泡排列较规则,合胞体带向外长有微毛,排列整齐,微毛外侧有较厚的糖衣,原头节内含有多种不同类型的细胞,实质细胞的细胞核大而明显,核仁居于中央,核内异染色质较少;而不同浓度PD98059作用后泡状棘球蚴原头节体被合胞体带变薄,囊泡扩张,出现空泡结构,微毛缺损甚至消失;一部分实质细胞基质浓缩,核仁消失,核异染色质增多,细胞减少,且出现许多空泡及脂滴。Western bolt检测显示,6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L PD98059作用于泡状棘球蚴原头节1d和3d后,均可降低泡状棘球蚴原头节p-ERK蛋白表达水平。Caspase-3活性检测发现,与DMSO对照组相比,不同浓度PD98059作用于泡状棘球蚴原头节1d和2d后均可增加原头节的caspase-3酶活性。TUNEL试剂盒检测发现,25μmol/L、50μmol/L PD98059作用于泡状棘球蚴原头节24h后可促使泡状棘球蚴原头节发生凋亡。结论:ERK抑制剂PD98059在体外可明显抑制泡状棘球蚴原头节的生长,有望成为一种新型的抗包虫药物。
【关键词】：ERK抑制剂 泡状棘球蚴原头节 体外实验
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R532.32
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-13
• 材料与方法13-25
• 1 材料13-18
• 1.1 泡状棘球蚴原头节的采集13
• 1.2 主要试剂13-14
• 1.3 主要仪器设备14
• 1.4 主要溶液配制14-18
• 2 方法18-25
• 2.1 泡状棘球蚴原头节的获得及体外培养18
• 2.2 ERK抑制剂PD98059体外作用于原头节18
• 2.3 倒置显微镜观察PD98059体外对泡状棘球蚴原头节形态和活力的影响18-19
• 2.4 透射电子显微镜观察PD98059作用后原头节内部结构的变化19
• 2.5 Western blot检测PD98059作用后原头节内p-ERK蛋白表达水平19-21
• 2.6 Caspase-3 活性检测试剂盒检测药物作用后原头节体内caspase-3 酶活性21-23
• 2.7 TUNEL检测试剂盒检测PD98059作用后原头节体内的凋亡状况23-24
• 2.8 统计学分析24-25
• 结果25-32
• 1 PD98059体外作用后的泡球蚴原头节的形态变化25-26
• 2 PD98059对泡状棘球蚴原头节生长的影响26
• 3 PD98059对泡状棘球蚴原头节内部超微结构的影响26-28
• 4 PD98059对泡状棘球蚴原头节p-ERK蛋白表达水平的影响28-29
• 5 PD98059对体外泡状棘球蚴原头节内caspase-3 酶活性的影响29-30
• 6 TUNEL检测PD98059作用后体外泡状棘球蚴原头节的凋亡状况30-32
• 讨论32-36
• 结论36-37
• 参考文献37-41
• 文献综述41-47
• 参考文献44-47
• 致谢47-48
• 作者简介48-49
• 导师评阅表49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 敖其尔,温浩,杨文光;口服和注射阿苯达唑脂质体治疗小鼠肝及腹腔细粒棘球蚴感染的比较观察[J];地方病通报;2003年01期

2 姚秉礼,富立民,徐德征,李俊,丁兆勋,蔡世烈;新疆肝泡状棘球蚴病43例的临床观察和治疗[J];寄生虫学与寄生虫病杂志;1985年04期

3 樊玉祥;任伟新;;肝泡状棘球蚴病治疗方法的研究进展[J];中国人兽共患病学报;2012年03期

  本文关键词：ERK抑制剂PD98059对泡状棘球蚴原头节生长的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：351277