高精度棕榈酰化修饰蛋白大规模分析方法的建立及其应用
发布时间：2022-01-03 00:16
蛋白质的S-棕榈酰化修饰是一种重要的翻译后修饰,其动态性和唯一的可逆性赋予了蛋白丰富的生理功能。棕榈酰化修饰对于病毒侵染宿主细胞具有重要作用,它是通过影响病毒蛋白在细胞膜上的定位和聚集来影响宿主细胞的感染过程,这在甲型流感病毒中已有研究。棕榈酰化修饰蛋白主要分布在脑组织中,能够调节神经元蛋白的功能,其含量的异常与神经系统疾病密切相关。而狂犬病作为一种人兽共患恶性传染病,有80%的病例为脑性狂犬病,在体内显示出强神经噬性,研究狂犬病小鼠脑组织中的棕榈酰化修饰蛋白,对理解狂犬病病毒感染过程具有重要意义。目前,对棕榈酰化修饰蛋白的研究主要依赖于酰基-生物素交换法（Acyl-Biotin Exchange,ABE）,该方法通过羟胺（HA）切割目的蛋白从而暴露出新的巯基位点,将带有生物素的巯基反应试剂与巯基进行反应,最后利用链霉亲和素琼脂糖凝珠对生物素化蛋白进行纯化富集,实现棕榈酰化修饰蛋白的检测。但该方法假阳性率高,且修饰位点定位不准确,这些缺点极大限制了棕榈酰化修饰蛋白的研究与应用。本论文对传统ABE方法进行改进,建立了一种可靠性较高的棕榈酰化修饰蛋白分析方法,并成功应用于狂犬病小鼠模型中。...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
棕榈酰化修饰蛋白在上清和沉淀中的分布情况
TCEP前处理对ABE反应的影响
第2章棕榈酰化蛋白分析方法的建立与应用18图2.2TCEP前处理对ABE反应的影响2.3.3琼脂糖凝珠富集实验的检测将经过ABE反应的蛋白留取少部分样本记作Input，剩余大部分样本与链霉亲和素琼脂糖凝珠进行特异性结合，室温翻转2h，500g离心5min，收集离心后的上清记作Super，将洗脱后的蛋白样本记作Pull。分别将Input、Super、Pull三组的+HA样本和-HA样本进行Western反应。结果如图2.3所示，Super组出现了较为明显的条带信号，表明部分蛋白没有被琼脂糖凝珠结合而是保留在上清中。同时，Pull组没有出现信号条带，证明经富集切割后的样品不能被Western-Biotin检测，与理论相符合。传统方法不能实现对富集蛋白在质谱测试前的及时监控，需要开发新的检测手段以保障质谱检测的高效性。图2.3富集蛋白琼脂糖凝珠的检测图2.4传统法[70]与煮沸法流程图
【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光碳量子点的特性及检测巯基化合物的研究进展[J]. 董小绮,菅晓婷,柴双双,杨江华,肖雪棋,郑力孟,吕俊杰. 化学研究. 2018(05)
[2]巯基检测方法研究进展[J]. 张力文,尚中博,常志显,祁志冲,李德亮. 河南大学学报(自然科学版). 2018(04)
[3]狂犬病流行病学研究进展[J]. 尹景峰. 现代农业. 2017(11)
[4]狂犬病的危害及其防控策略的研究进展[J]. 鲍建光. 中国医药指南. 2017(06)
[5]狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展[J]. 汪孟航,朱洪伟,何民辉,温永俊,程世鹏. 中国畜牧兽医. 2016(12)
[6]狂犬病流行与防治研究进展[J]. 毛伟成,蓝荣伟,蒙南新,虞海芬. 医学动物防制. 2015(03)
[7]蛋白质巯基亚硝基化分子机制及其疾病相关性[J]. 石婷,陈铭,陈雄平,汪汲涛,万锕俊,赵一雷. 化学进展. 2015(05)
[8]小分子生物硫醇荧光探针研究进展[J]. 王胜清,申世立,张延如,戴溪,赵宝祥. 有机化学. 2014(09)
[9]蛋白质棕榈酰化修饰的分析方法进展[J]. 方彩云,张晓勤,陆豪杰. 分析化学. 2014(04)
[10]巯基功能化沸石吸附Hg2+特征及固化/稳定化含汞废物研究[J]. 张新艳,王起超,张少庆,孙晓静,张仲胜. 环境科学学报. 2009(10)
博士论文
[1]狂犬病毒强弱毒株差异性激活星状胶质细胞天然免疫通路的机制研究[D]. 田斌.华中农业大学 2018
[2]狂犬病的探索治疗以及相关病毒在神经科学中的应用[D]. 李亮.华中农业大学 2017
[3]狂犬病毒先导RNA及其宿主互作蛋白的功能研究[D]. 张冉.华中农业大学 2017
[4]中国动物狂犬病流行病学研究[D]. 冯烨.中国人民解放军军事医学科学院 2015
[5]狂犬病毒感染的神经细胞差异蛋白质组学研究及伴侣素CCTγ的功能分析[D]. 张金阳.浙江大学 2012
硕士论文
[1]基于酰基-生物素交换的棕榈酰化修饰蛋白质组分析方法学研究[D]. 程炜.吉林大学 2019
[2]基于高速离心和去污剂抽提的膜蛋白样品制备方法的建立与优化[D]. 周艳婷.华东理工大学 2018
[3]载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A（APOBEC3A）的克隆表达及其生物学功能研究[D]. 成珊.第四军医大学 2017
[4]有机小分子荧光探针的合成及性能研究[D]. 刘晓东.苏州大学 2014
[5]谷胱甘肽抗氧化系统在早期糖尿病肾病中的变化[D]. 包蓓艳.浙江大学 2002
本文编号：3565171
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
棕榈酰化修饰蛋白在上清和沉淀中的分布情况
TCEP前处理对ABE反应的影响
第2章棕榈酰化蛋白分析方法的建立与应用18图2.2TCEP前处理对ABE反应的影响2.3.3琼脂糖凝珠富集实验的检测将经过ABE反应的蛋白留取少部分样本记作Input，剩余大部分样本与链霉亲和素琼脂糖凝珠进行特异性结合，室温翻转2h，500g离心5min，收集离心后的上清记作Super，将洗脱后的蛋白样本记作Pull。分别将Input、Super、Pull三组的+HA样本和-HA样本进行Western反应。结果如图2.3所示，Super组出现了较为明显的条带信号，表明部分蛋白没有被琼脂糖凝珠结合而是保留在上清中。同时，Pull组没有出现信号条带，证明经富集切割后的样品不能被Western-Biotin检测，与理论相符合。传统方法不能实现对富集蛋白在质谱测试前的及时监控，需要开发新的检测手段以保障质谱检测的高效性。图2.3富集蛋白琼脂糖凝珠的检测图2.4传统法[70]与煮沸法流程图
【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光碳量子点的特性及检测巯基化合物的研究进展[J]. 董小绮,菅晓婷,柴双双,杨江华,肖雪棋,郑力孟,吕俊杰. 化学研究. 2018(05)
[2]巯基检测方法研究进展[J]. 张力文,尚中博,常志显,祁志冲,李德亮. 河南大学学报(自然科学版). 2018(04)
[3]狂犬病流行病学研究进展[J]. 尹景峰. 现代农业. 2017(11)
[4]狂犬病的危害及其防控策略的研究进展[J]. 鲍建光. 中国医药指南. 2017(06)
[5]狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展[J]. 汪孟航,朱洪伟,何民辉,温永俊,程世鹏. 中国畜牧兽医. 2016(12)
[6]狂犬病流行与防治研究进展[J]. 毛伟成,蓝荣伟,蒙南新,虞海芬. 医学动物防制. 2015(03)
[7]蛋白质巯基亚硝基化分子机制及其疾病相关性[J]. 石婷,陈铭,陈雄平,汪汲涛,万锕俊,赵一雷. 化学进展. 2015(05)
[8]小分子生物硫醇荧光探针研究进展[J]. 王胜清,申世立,张延如,戴溪,赵宝祥. 有机化学. 2014(09)
[9]蛋白质棕榈酰化修饰的分析方法进展[J]. 方彩云,张晓勤,陆豪杰. 分析化学. 2014(04)
[10]巯基功能化沸石吸附Hg2+特征及固化/稳定化含汞废物研究[J]. 张新艳,王起超,张少庆,孙晓静,张仲胜. 环境科学学报. 2009(10)
博士论文
[1]狂犬病毒强弱毒株差异性激活星状胶质细胞天然免疫通路的机制研究[D]. 田斌.华中农业大学 2018
[2]狂犬病的探索治疗以及相关病毒在神经科学中的应用[D]. 李亮.华中农业大学 2017
[3]狂犬病毒先导RNA及其宿主互作蛋白的功能研究[D]. 张冉.华中农业大学 2017
[4]中国动物狂犬病流行病学研究[D]. 冯烨.中国人民解放军军事医学科学院 2015
[5]狂犬病毒感染的神经细胞差异蛋白质组学研究及伴侣素CCTγ的功能分析[D]. 张金阳.浙江大学 2012
硕士论文
[1]基于酰基-生物素交换的棕榈酰化修饰蛋白质组分析方法学研究[D]. 程炜.吉林大学 2019
[2]基于高速离心和去污剂抽提的膜蛋白样品制备方法的建立与优化[D]. 周艳婷.华东理工大学 2018
[3]载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A（APOBEC3A）的克隆表达及其生物学功能研究[D]. 成珊.第四军医大学 2017
[4]有机小分子荧光探针的合成及性能研究[D]. 刘晓东.苏州大学 2014
[5]谷胱甘肽抗氧化系统在早期糖尿病肾病中的变化[D]. 包蓓艳.浙江大学 2002
本文编号：3565171
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