肠道病毒EV71的肠道感染途径和免疫激活特性初探

发布时间：2022-01-14 23:14

　　肠道病毒EV71不仅是引起婴幼儿手足口病的主要病原体之一,也能够引起病毒性脑炎、病毒性肺炎、无菌性脑膜炎和心肌炎等病症,严重时甚至导致死亡。所以近些年来,EV71的致病机理、重要结构蛋白的作用、抗病毒药物筛选、抗病毒天然免疫机制、疫苗的研发,以及中枢神经系统感染机制等长期都是研究的热点。本实验室已通过一日龄ICR乳鼠的动态感染模型证明,小肠是EV71进入人体、复制增殖的第一阶段。本论文首先构建并纯化高滴度的带GFP绿色荧光标记的EV71重组病毒颗粒,以此作为研究材料,口腔灌注新生乳鼠,并感染不同种典型肠细胞CCD18-Co、DLD-1和FHC,探究EV71感染小肠的具体部位和易感肠细胞类型。通过实验,最终验证了小肠中的空肠是EV71感染复制的主要部位,且EV71对肠上皮细胞和肠纤维细胞都有较强的感染效果,尤其是肠上皮细胞。同时本研究还构建了SCARB2缺陷型易感细胞,以便观察EV71感染效果的差异,并证明了 SCARB2受体在EV71感染中发挥重要作用。接着从体内外水平检测肠吸收抑制剂阿卡波糖和促进剂癸酸钠对于EV71感染小肠的影响,经乳鼠口腔灌喂、Quantitative real-... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１ＥＶ７１病毒三維结构图丨９］，其中蓝色部分为ＶＰ１蛋白，绿色部分为ＶＰ２衣壳蛋白，红色部分为ＶＰ３??结构蛋白，洋红色点状物为钙离子，橙色部分为口袋因子

己有研宄表明，ＣｓＣｌ溶液中，ＥＶ７１病毒颗粒浮力密度为１．３４ｇ／ｍｌ｜３９Ｉ。所以经??ＣｓＣｌ密度梯度超高速离心后，于１．２ｇ／ｍ丨和１．４ｇ／ｍｌ的ＣｓＣｌ溶液的界面之间，出??现的一条肉眼可见的乳白色带状物，即为ＥＶ７１病毒颗粒带，如下图２－４所示。??遏ｈ??图２＞４?ＥＶ７Ｉ－ＧＦＰ纯化浓缩结果图??２．３．２?ＥＶ７１－ＧＦＰ滴度测定的结果??持续观察％ｈ发现，ＲＤ细胞被感染７２ｈ后，病毒浓度较高的孔出现完全的ＣＰＥ，??也有绿色荧光，而病毒浓度较低的孔，则没有出现ＣＰＥ，组间差异明显故有区分??度，组内差异不大故具有可信度，是统计的最佳时刻，用Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ两氏法计??算滴度如下：??表２－１?ＥＶ７１－ＧＦＰ病毒滴度记录表??病毒稀释度ＣＰＥ孔数无ＣＰＥ孔数?Ｍ?＋?ＣＰＥ孔＾＾百５Ｈ匕??ＣＰＥ孔数无ＣＰＥ孔数?（７°??１〇－＇?８?０?３７?０?１００?（３７／３７）??１０＇２?８?０?２９?０?１００?（２９／２９）??１〇－３?７?０?２１?０?１００?（２１／２１）??１０＇４?８?０?１４?０?１００

，不加ＥＶ７１也不给药）。??后的细胞聚合度达到６０？８０％时，吸走孔中原有培养基添加４ｍｌ含２％ＦＢＳ的相应完全生长培养基，同时Ａ组）和阿卡波糖药液，Ｂ组加入等量病毒浓缩液（ＭＯＩ＝３）和量病毒浓缩液（ＭＯＩ＝３），Ｄ组加入与ＡＢＣ组中病毒浓基，然后轻晃平板使病毒均匀接触到底部的所有细胞，置／〇Ｃ０２）中继续培养；??Ｂ检测：感染３６ｈ后收集三种肠细胞共计１２组，制备蛋一一上样电泳一一转膜——孵育相应抗体一一显影，具以这里不再详细描述。??果及分析??ｔｉｔａｔｉｖｅ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ检测ＥＶ７１在小肠中的动态分布结乳鼠如下图所示：??

【参考文献】：
期刊论文
[1]手足口病防控策略探讨[J]. 卞莲莲,苏瑶,毛群颖,吴星.  微生物学免疫学进展. 2018(01)
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[3]幼儿园手足口病防控策略监督与指导浅析[J]. 刘桂杰.  中西医结合心血管病电子杂志. 2017(27)
[4]狂犬病人免疫球蛋白在临床上的应用[J]. 姚琼,顾克有.  中国疫苗和免疫. 2009(04)

硕士论文
[1]健康管理理念在手足口病防控中的应用研究[D]. 尹颖.南京医科大学 2011



本文编号：3589404