包虫病诊断抗原分子Eg-00512的筛
发布时间：2022-01-27 07:27
目的筛选细粒棘球绦虫原头蚴抗原分子Eg-00512,并进行重组表达、纯化及免疫特性鉴定,以期作为棘球蚴病特异性诊断抗原。方法对国家人类基因组南方研究中心（CHGCS）发表的细粒棘球绦虫4个不同发育阶段的表达谱数据进行差异比较分析,筛选仅在原头蚴阶段特异表达的基因Eg-00512;利用DNAStar软件包对其编码蛋白Eg-00512进行抗原表位分析;选取合适的序列片段作为目的片段,构建基因工程菌株Eg-00512/pET-24a/BL-21,经诱导表达、纯化获得重组蛋白rEg-00512。将BALB/c小鼠随机分为免疫组、佐剂对照组、PBS对照组,分别经皮下多点注射重组蛋白、PBS+弗氏佐剂和PBS,2周后加强免疫一次。分别于免疫前,第一次免疫后2、4周每组小鼠尾静脉采血,免疫后5周摘眼球法采血,采用ELISA检测各时间点血清中特异性IgG抗体水平变化;以该血清为一抗,采用Western blot分析重组蛋白的免疫反应性。结果筛选出仅在细粒棘球蚴原头蚴阶段高表达的Eg-00512基因。该基因编码203个氨基酸,分子质量单位为23ku,其抗原表位主要位于1-15、55-93、111-119...
【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2017,12(01)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
图２重组质粒ｒＥｇ－００５１２的酶切鉴定ＭＤＮＡ标志物１重组质粒ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切２重组质粒ｒＥｇ－００５１２
ＮＡ标志物１重组质粒ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切２重组质粒ｒＥｇ－００５１２图２重组质粒ｒＥｇ－００５１２的酶切鉴定ＭＤＮＡｍａｒｋｅｒ１ＰｌａｓｍｉｄｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙＳｍａＩａｎｄＸｈｏⅠ２ＰｌａｓｍｉｄＤＮＡＦｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒＥｇ－００５１２ｂｙｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓｄｉｇｅｓｔｉｏｎＭ蛋白标志物１未诱导阴性对照２诱导后全菌３超声破碎上清４超声破碎沉淀５纯化重组蛋白ｒＥｇ－００５１２图３重组蛋白ｒＥｇ－００５１２的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｋｅｒ１Ｕｎｉｎｄｕｃｅｄｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ２Ａｌｌｂａｃ－ｔｅｒｉａａｆｔｅｒｉｎｄｕｃｔｉｏｎ３Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｏｆｓｏｎｉｃａｔｉｏｎｌｙｓａｔｅ４Ｓｅｄｉ－ｍｅｎｔｏｆｓｏｎｉｃａｔｉｏｎｌｙｓａｔｅ５ＰｕｒｆｉｅｄｒＥｇ－００５１２ａｆｔｅｒｄｉａｌｙｓｉｓＦｉｇ．３ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｒＥｇ－００５１２５小鼠血清特异性ＩｇＧ抗体水平重组蛋白ｒＥｇ－００５１２首次免疫小鼠两周，小鼠血清特异性ＩｇＧ抗体水平开始升高，加强免疫后特异性ＩｇＧ抗体水平随时间延长显著升高，５周时达到高峰（Ａ４５０值为１．８０７±０．７６７），与佐剂对照组（０．１１１±０．０１４）和ＰＢＳ对照组（０．１３２±０．０２４６）相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；佐剂组和ＰＢＳ对照组的ＩｇＧ抗体水平无显著变化（Ｐ＞０．０１）（图４）。６重组蛋白ｒ
≡?逡资艿剿拗饕蚋腥舅?盏疾??拿庖哂Υ鸬墓?击，终止其生长发育。只有较少数的病原体能突破宿主的免疫保护，成功逃逸，继而发育形成病灶。新疆福海县居民普查结果显示，血清抗体阳性率高达２１．３％而棘球蚴病患病率为２．９％［１５］。高血清抗体阳性率低患病率给棘球蚴病的确诊带来了困难［１６］。患者在尚未诊断明确的情况下盲目用药，既无法确定用药的合适时机，又无法在短期内判断治疗效果，所以!需敏感性和特异性特异性高的诊断抗原分子［１７］。图４小鼠血清抗ｒＥｇ－００５１２ＩｇＧ抗体水平的变化Ｆｉｇ．４Ｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉ－ｒＥｇ－００５１２ＩｇＧｉｎｍｕｒｉｎｅｓｅｒａＭ蛋白标志物１ｒＥｇ－００５１２与细粒棘球蚴感染小鼠血清反应条带２ｒＥｇ－００５１２与免疫组小鼠血清反应条带３ＰＢＳ对照组小鼠血清图５对组蛋白ｒＥｇ－００５１２的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｋｅｒ１Ｓｅｒｕｍｏｆｓｅｃｏｎｄａｒｙｉｎｆｅｃｔｉｏｎ２Ｓｅｒｕｍｏｆｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ３ＳｅｒｕｍｏｆＰＢＳｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐＦｉｇ．５ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒＥｇ－００５１２ｗｉｔｈＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ近年来随着分子生物学技术和生物信息学的迅速·４９·中国病原生物学杂志ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｇｅｎＢｉｏｌｏｇｙ２０１７年１月第１２卷第１期Ｊａｎｕａｒｙ２０１７，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．１
【参考文献】：
期刊论文
[1]细粒棘球绦虫原头节抗原分子Eg-01883的克隆、表达及免疫原性分析[J]. 赵殷奇,李子华,王浩,朱明星,牛楠,王娅娜,赵嘉庆,李娜,佟雪琪,宋佳卉,赵巍. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2016(03)
[2]全国重点寄生虫病的防控形势与挑战[J]. 严俊,胡桃,雷正龙. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2015(06)
[3]金标免疫层析读数仪在棘球蚴病抗体检测中的应用[J]. 谢贵林,殷军霞,段新宇,冯晓辉,王洋,蒋凯,陈新梅. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2015(03)
[4]棘球蚴病流行病学研究进展[J]. 齐颜凤,伍卫平. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2013(02)
[5]CD169基因及其蛋白性质和结构的生物信息学分析[J]. 周傲,陈星,张滢寅,张淑君. 中国农学通报. 2011(26)
[6]Epidemiological Studies on Cystic Echinococcosis in China─A Review[J]. CHAI JUN-JIE(National Hydatid Disease Center of China, Xnjiang Institute for Endemic Diseases Control and Research, Urumqi Xinjiang China 830002). Biomedical and Environmental Sciences. 1995(02)
[7]包虫(棘球蚴)病在我国的流行情况[J]. 棘球蚴病研究协作组. 新疆农业科学. 1989(03)
本文编号：3612045
【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2017,12(01)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
图２重组质粒ｒＥｇ－００５１２的酶切鉴定ＭＤＮＡ标志物１重组质粒ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切２重组质粒ｒＥｇ－００５１２
ＮＡ标志物１重组质粒ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切２重组质粒ｒＥｇ－００５１２图２重组质粒ｒＥｇ－００５１２的酶切鉴定ＭＤＮＡｍａｒｋｅｒ１ＰｌａｓｍｉｄｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙＳｍａＩａｎｄＸｈｏⅠ２ＰｌａｓｍｉｄＤＮＡＦｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒＥｇ－００５１２ｂｙｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓｄｉｇｅｓｔｉｏｎＭ蛋白标志物１未诱导阴性对照２诱导后全菌３超声破碎上清４超声破碎沉淀５纯化重组蛋白ｒＥｇ－００５１２图３重组蛋白ｒＥｇ－００５１２的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｋｅｒ１Ｕｎｉｎｄｕｃｅｄｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ２Ａｌｌｂａｃ－ｔｅｒｉａａｆｔｅｒｉｎｄｕｃｔｉｏｎ３Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｏｆｓｏｎｉｃａｔｉｏｎｌｙｓａｔｅ４Ｓｅｄｉ－ｍｅｎｔｏｆｓｏｎｉｃａｔｉｏｎｌｙｓａｔｅ５ＰｕｒｆｉｅｄｒＥｇ－００５１２ａｆｔｅｒｄｉａｌｙｓｉｓＦｉｇ．３ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｒＥｇ－００５１２５小鼠血清特异性ＩｇＧ抗体水平重组蛋白ｒＥｇ－００５１２首次免疫小鼠两周，小鼠血清特异性ＩｇＧ抗体水平开始升高，加强免疫后特异性ＩｇＧ抗体水平随时间延长显著升高，５周时达到高峰（Ａ４５０值为１．８０７±０．７６７），与佐剂对照组（０．１１１±０．０１４）和ＰＢＳ对照组（０．１３２±０．０２４６）相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；佐剂组和ＰＢＳ对照组的ＩｇＧ抗体水平无显著变化（Ｐ＞０．０１）（图４）。６重组蛋白ｒ
≡?逡资艿剿拗饕蚋腥舅?盏疾??拿庖哂Υ鸬墓?击，终止其生长发育。只有较少数的病原体能突破宿主的免疫保护，成功逃逸，继而发育形成病灶。新疆福海县居民普查结果显示，血清抗体阳性率高达２１．３％而棘球蚴病患病率为２．９％［１５］。高血清抗体阳性率低患病率给棘球蚴病的确诊带来了困难［１６］。患者在尚未诊断明确的情况下盲目用药，既无法确定用药的合适时机，又无法在短期内判断治疗效果，所以!需敏感性和特异性特异性高的诊断抗原分子［１７］。图４小鼠血清抗ｒＥｇ－００５１２ＩｇＧ抗体水平的变化Ｆｉｇ．４Ｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉ－ｒＥｇ－００５１２ＩｇＧｉｎｍｕｒｉｎｅｓｅｒａＭ蛋白标志物１ｒＥｇ－００５１２与细粒棘球蚴感染小鼠血清反应条带２ｒＥｇ－００５１２与免疫组小鼠血清反应条带３ＰＢＳ对照组小鼠血清图５对组蛋白ｒＥｇ－００５１２的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｋｅｒ１Ｓｅｒｕｍｏｆｓｅｃｏｎｄａｒｙｉｎｆｅｃｔｉｏｎ２Ｓｅｒｕｍｏｆｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ３ＳｅｒｕｍｏｆＰＢＳｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐＦｉｇ．５ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒＥｇ－００５１２ｗｉｔｈＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ近年来随着分子生物学技术和生物信息学的迅速·４９·中国病原生物学杂志ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｇｅｎＢｉｏｌｏｇｙ２０１７年１月第１２卷第１期Ｊａｎｕａｒｙ２０１７，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．１
【参考文献】：
期刊论文
[1]细粒棘球绦虫原头节抗原分子Eg-01883的克隆、表达及免疫原性分析[J]. 赵殷奇,李子华,王浩,朱明星,牛楠,王娅娜,赵嘉庆,李娜,佟雪琪,宋佳卉,赵巍. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2016(03)
[2]全国重点寄生虫病的防控形势与挑战[J]. 严俊,胡桃,雷正龙. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2015(06)
[3]金标免疫层析读数仪在棘球蚴病抗体检测中的应用[J]. 谢贵林,殷军霞,段新宇,冯晓辉,王洋,蒋凯,陈新梅. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2015(03)
[4]棘球蚴病流行病学研究进展[J]. 齐颜凤,伍卫平. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2013(02)
[5]CD169基因及其蛋白性质和结构的生物信息学分析[J]. 周傲,陈星,张滢寅,张淑君. 中国农学通报. 2011(26)
[6]Epidemiological Studies on Cystic Echinococcosis in China─A Review[J]. CHAI JUN-JIE(National Hydatid Disease Center of China, Xnjiang Institute for Endemic Diseases Control and Research, Urumqi Xinjiang China 830002). Biomedical and Environmental Sciences. 1995(02)
[7]包虫(棘球蚴)病在我国的流行情况[J]. 棘球蚴病研究协作组. 新疆农业科学. 1989(03)
本文编号：3612045
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