乙肝病毒S抗原和preS1抗原表位融合蛋白（S/preS1）在CHO细胞中的稳定高效表达

发布时间：2022-07-02 11:31

　　乙型肝炎是一种严重的全球性疾病,易引发肝硬化和肝癌。目前国内外尚无显著有效的乙肝治疗方法,主要采用预防为主、治疗为辅的方针。自从1981年第一代乙肝疫苗问世至今,乙型肝炎的蔓延得到有效地控制,全球肝癌的发生率下降了75%。目前全球广泛使用的是利用基因工程技术在酵母和哺乳动物细胞中表达的乙肝病毒表面抗原S蛋白（HBsAg）疫苗,接种疫苗后约有10-15%的人群无应答或者低应答,且一般不能诱导细胞免疫应答。研制能克服现有乙肝疫苗缺陷的新型乙肝疫苗已成为一项迫切的研究课题。研究表明,在主蛋白抗原S的基础上增加额外的HBV表面抗原能够增强免疫原性,含前S蛋白的重组乙型肝炎疫苗是第三代乙肝疫苗研发的重点,有望替代现在广泛使用的基因工程疫苗。本研究的研究思路是将乙肝病毒S抗原基因和preS1抗原表位（21-47位氨基酸）基因组合形成融合基因,在CHO细胞中实现S/preS1的稳定高效表达。本研究采用转录水平调控为主、转录后调控为辅的表达载体设计思想,将S/preS1基因插入含有克服位置效应、细胞内源性强启动子及mRNA运输及稳定性调控元件的真核细胞表达载体,成功构建表达乙肝病毒S抗原和preS1抗... 

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 高效表达乙肝表面抗原S/preS1重组CHO细胞系的构建
    1 材料
    2 方法
    3 结果
        3.1 S/preS1基因表达载体HMRCHEF53u/Neo-S/preS1的构建
        3.2 高效表达S/preS1 CHO细胞系的克隆筛选
        3.3 10G6细胞系表达S/preS1的抗原性分析
    4 讨论
    5 结论
第二部分 10G6细胞的生长和代谢特征
    1 材料
    2 方法
    3 结果
        3.1 10G6细胞体外培养的形态
        3.2 10G6细胞有血清培养的细胞生长与代谢
        3.3 10G6细胞连续批次贴壁培养的S/preS1表达稳定性
        3.4 10G6细胞无血清培养的细胞生长和代谢
        3.5 10G6细胞连续批次悬浮培养的细胞生长和S/preS1表达稳定性
    4 讨论
    5 结论
第三部分 10G6细胞系无血清培养工艺的建立
    1 材料
    2 方法
    3 结果
        3.1 培养温度对10G6细胞生长和S/preS1表达的影响
        3.2 接种密度对10G6细胞生长和S/preS1表达的影响
        3.3 流加培养基对10G6细胞生长和S/preS1表达的影响
        3.4 起始流加时间对10G6细胞生长和S/preS1表达的影响
        3.5 10G6细胞在无血清流加培养中的细胞生长和S/preS1表达
        3.6 10G6细胞在1L生物反应器中流加培养
    4 讨论
    5 结论
总结
参考文献
致谢
发表论文


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3654288