宿主蛋白CLDN12和UGGT1参与丙肝病毒入侵的功能研究

发布时间：2022-10-15 14:45

　　丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）是肝炎、肝硬化甚至肝癌等肝脏疾病的主要致病因素之一。HCV患者多、传播广、变异快等特点为其治疗带来了难度。目前HCV主要治疗手段是通过直接抗病毒药物DAA,而靶向HCV宿主因子是另一种抗HCV的策略,人类尚没有研制出针对HCV的有效疫苗。HCV生命周期的主要步骤包括病毒进入宿主细胞,病毒基因组的脱壳,病毒蛋白的翻译,病毒基因组的复制以及病毒微粒的组装和释放。其中病毒进入细胞的过程由多种共受体介导,如CLDN1、CD81、SR-BI及Occludin等。在本论文中,我们确定了 CLDN12和UGGT1可以作为宿主因子在HCV进入过程中发挥重要作用。实验表明,敲降CLDN12可以抑制HCV进入细胞,而过表达CLDN12可以促进HCV进入细胞。因此我们猜测CLDN12是HCV的一个共受体。同时我们发现,CLDN12同另一个HCV共受体CLDN1一样,可以与共受体CD81结合,这从另一方面支持了我们的假设。此外,CLDN12与claudins家族蛋白CLDN1、CLDN6、CLDN9一样,可以和COPⅡ运输途径中关键的货物分选蛋白Sec... 

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
    1 HCV简介
        1.1 HCV及其发病率和治疗现状
        1.2 HCV的基因分型
        1.3 HCV病毒基因组
        1.4 HCV的生命周期
        1.5 HCV entry过程
    2 Claudins以及CLDN12
    3 SR-BI
    4 糖基化和N糖基化
    5 UGGTI
    6 研究内容概述
材料与方法
    1 实验材料
        1.1 细胞
        1.2 质粒
        1.3 抗体
        1.4 细胞培养相关
        1.5 固体化学药品
        1.6 液体试剂
        1.7 SiRNA序列
        1.8 Q-PCR引物
        1.9 试剂盒
        1.10 Buffer配方
        1.11 实验仪器与耗材
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 HCV病毒株Jcl和假病毒HCVpp的制备
        2.3 免疫印迹
        2.4 免疫共沉淀
        2.5 原核蛋白的表达与纯化
        2.6 GST-pull down
        2.7 免疫荧光
        2.8 Q-PCR
        2.9 分子克隆及点突变
        2.10 敲降实验
        2.11 蛋白质折叠测定
        2.12 数据处理与统计
实验结果
    第一部分
        1.1 CLDN12是HCV共受体
            1.1.1 CLDN 12促进HCV侵染宿主细胞
            1.1.2 CLDN12和CD81的相互作用
        1.2 CLDN12是COPⅡ货物
            1.2.1 CLDN12 tail与Sec24C相互作用
            1.2.2 COPⅡ影响CLDN12定位
        1.3 宿主因子CLDN12的N-糖基化影响HCV
            1.3.1 CLDN12发生N-糖基化
            1.3.2 CLDN12的N-糖基化影响CLDN12细胞内分布
        第一部分 总结
    第二部分
        2.1 SR-BI与UGGT1和Calnexin的相互作用
            2.1.1 质谱鉴定分析SR-BI与UGGT1和Calnexin的相互作用
            2.1.2 Co-IP验证SR-BI与UGGT1和Calnexin相互作用
            2.1.3 SR-BI在Huh7.5.1细胞中与UGGT1和Calnexin存在共定位
        2.2 SR-BI的N-糖基化
            2.2.1 SR-BI蛋白水平依赖于UGGT1和N-糖基化
            2.2.2 预测的九个位点均参与SR-BI的N-糖基化
        2.3 UGGT1升高SR-BI水平,促进HCV感染
        2.4 SR-BI促进UGGT1介导的蛋白质折叠
        第二部分 总结
讨论
参考文献
综述
    参考文献
缩略语
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]丙型肝炎病毒非结构蛋白与宿主细胞蛋白相互作用的研究进展[J]. 张丹,冯国和.  世界华人消化杂志. 2011(02)
[2]四跨膜蛋白超家族与肝炎病毒的关系[J]. 张黎颖,成军,纪冬,刘妍,党晓燕,王春花,邓红,刘敏.  胃肠病学和肝病学杂志. 2004(01)

硕士论文
[1]基孔肯雅病毒nsP1蛋白棕榈酰化的研究[D]. 张娜.北京协和医学院 2018
[2]病毒蛋白NS3、K7及2C与宿主蛋白相互作用的研究[D]. 李叶.北京协和医学院 2018
[3]不同基因型的丙肝病毒NS5A蛋白与PI4KB竞争结合ACBD3的研究[D]. 杨小洁.北京协和医学院 2015



本文编号：3691496