伯式疟原虫内质网蛋白YOP1在蛋白质分泌中的作用研究

发布时间：2022-10-21 10:55

　　研究目的:疟疾是由疟原虫引起的一种严重危害生命健康的全球性传染疾病,其临床症状主要是由疟原虫在宿主红细胞内的无性生长增殖所引起的。疟原虫有多种种属,本文我们重点研究的是鼠源的伯氏疟原虫（Plasmodium berghei ANKA）,其可侵染鼠的正常红细胞。成熟红细胞无细胞器与细胞核,疟原虫侵入后可利用自身的内质网合成并分泌大量不同功能的蛋白质至红细胞胞浆或胞膜,从而完成对红细胞结构的重塑,以利于疟原虫摄取营养物质、进行细胞粘附、或逃逸免疫清除等。前期研究表明,伯式疟原虫表达真核细胞保守的内质网蛋白YOP1。YOP1通过诱导膜曲度来稳定管状内质网结构,缺失YOP1会影响内质网管状网络,而管状网络又与蛋白质分泌相关联。本文旨在研究伯式疟原虫YOP1（PbYOP1）的缺失对其蛋白分泌及致病能力的影响,以便寻找干扰疟原虫蛋白质合成与分泌的新方法,为疟疾疫苗的研制提供可靠的理论依据。研究内容:第一部分:利用野生型（wt）和YOP1缺失（△yop1）的伯式疟原虫分别感染Wistar大鼠,通过伯式疟原体外同步化培养技术得到大量发育至裂殖体时期的疟原虫化的红细胞并同时富集未感染疟原虫的红细胞。选用... 

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、伯氏疟原虫内质网蛋白YOP1的缺失对其蛋白质分泌的影响
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验动物与疟原虫
        1.1.2 主要实验试剂
        1.1.3 主要的实验相关仪器
        1.1.4 实验主要溶液的配置
        1.1.5 伯式疟原虫的保存与复苏
        1.1.6 伯式疟原虫的感染与鼠外周血虫血率的测定
        1.1.7 伯式疟原虫的体外培养与纯化
        1.1.8 红细胞膜表面蛋白的提取-胰酶表面处理法
        1.1.9 红细胞膜与疟原虫总蛋白的提取-低渗破膜法
        1.1.10 BCA法蛋白浓度测定
        1.1.11 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与考马斯亮蓝染色
        1.1.12 蛋白质脱盐
        1.1.13 iTRAQ法标记质谱蛋白样品
        1.1.14 DMT法标记质谱蛋白样品
        1.1.15 统计学分析
    1.2 结果
        1.2.1 伯式疟原虫的体外培养与裂殖体的纯化分离
        1.2.2 质谱检测裂殖体时期的红细胞中红细胞相关蛋白的变化(SS法)
        1.2.3 BCA法检测PbYOP1缺失对疟原虫感染的红细胞表面蛋白浓度的影响(SS法)
        1.2.4 质谱检测PbYOP1缺失对疟原虫蛋白质分泌的影响(SS法)
        1.2.5 质谱检测PbYOP1缺失对疟原虫蛋白质分泌的影响(HL法)
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、伯氏疟原虫内质网蛋白YOP1的缺失对其致病力的影响
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验动物与疟原虫
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要的实验相关仪器
        2.1.4 组织总RNA提取
        2.1.5 实时荧光定量(RT-PCR)技术
        2.1.6 统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 PbYOP1的缺失会降低患疟鼠肝脏细胞炎症相关因子的表达水平
        2.2.2 PbYOP1的缺失会降低患疟鼠肝脏细胞内质网应激分子的表达水平
        2.2.3 PbYOP1的缺失会降低患疟鼠脾脏细胞炎症相关因子的表达水平
        2.2.4 PbYOP1的缺失会降低患疟鼠脾脏细胞内质网应激分子的表达水平
    2.3 讨论
    2.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 疟原虫分泌蛋白重塑宿主红细胞的机制探讨
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3695499