A类清道夫受体SR-A在吸烟引起的COPD中的作用机制及在钩端螺旋体感染中的致病机理研究

发布时间：2023-01-15 11:08

　　A类清道夫受体SR-A是主要表达于巨噬细胞上的模式识别受体,可与多种配体相结合,如氧化或化学修饰的低密度脂蛋白,细菌脂多糖（LPS）,磷壁酸及双链RNA等。SR-A在机体识别、吞噬和清除病原体方面发挥着重要的固有免疫调控作用。除宿主防御外,SR-A在多种疾病中发挥重要作用,如动脉粥样硬化和阿尔兹海默氏症等。本文第一部分研究了SR-A在吸烟引起的COPD中的作用及机制,第二部分研究了SR-A在钩端螺旋体感染中病原体与宿主相互作用的分子机制。慢性阻塞性肺疾病（COPD）是以持续性气流受限呈进行性发展的肺部疾病。COPD患病率和死亡率均较高,造成的疾病负担严重。吸烟是引起COPD的主要环境因素,但遗传因素在COPD的发生中亦发挥重要作用。基因组关联研究发现清道夫受体SR-A基因多态性和COPD高风险率相关联。但SR-A在COPD发生发展中具体发挥何种作用并不清楚。本文第一部分通过吸烟诱导COPD动物模型研究发现,SR-A敲除(SR-A^-/-)小鼠与野生型（WT）小鼠相比出现更严重的COPD病理表现和肺功能损伤。通过对肺组织匀浆检测脂质氧化水平,发现SR-A^-/... 

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一章 SR-A在 COPD中发挥的作用
    绪论
    1.1 引言
    1.2 实验材料
        1.2.1 实验动物
        1.2.2 实验用烟
        1.2.3 实验细胞
        1.2.4 主要实验试剂及试剂配制
        1.2.5 主要实验器材及仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 建立COPD小鼠模型
        1.3.2 测量小鼠肺功能
        1.3.3 提取小鼠原代肺泡巨噬细胞
        1.3.4 RNA抽提
        1.3.5 RNA反转录成cDNA
        1.3.6 Real-time PCR检测基因表达
        1.3.7 组织石蜡包埋和HE染色
        1.3.8 Masson染色
        1.3.9 MDA测定
        1.3.10 制备香烟浸出液(CSE)
        1.3.11 CSE细胞毒性测定
        1.3.12 提取小鼠原代腹腔巨噬细胞
        1.3.13 CSE刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞
        1.3.14 数据处理
    1.4 实验结果
        1.4.1 香烟刺激后WT和 SR-A~(-/-)小鼠的肺功能
        1.4.2 香烟刺激后WT和 SR-A~(-/-)小鼠的肺部病理变化
        1.4.3 香烟刺激后WT和 SR-A~(-/-)小鼠的肺部脂质氧化水平
        1.4.4 香烟刺激后WT和 SR-A~(-/-)小鼠的肺泡巨噬细胞抗氧化基因表达情况
        1.4.5 确定最适香烟浸出液(CSE)刺激细胞浓度
        1.4.6 CSE刺激WT和 SR-A~(-/-)小鼠腹腔巨噬细胞后的细胞脂质氧化损伤
        1.4.7 CSE刺激WT和 SR-A~(-/-)小鼠腹腔巨噬细胞后的抗氧化基因表达
        1.4.8 CSE刺激WT和 SR-A~(-/-)小鼠腹腔巨噬细胞后的炎症因子TNF-α的表达
    1.5 讨论
第二章 SR-A在钩端螺旋体感染中的致病机理研究
    绪论
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验菌株
        2.2.2 实验动物
        2.2.3 实验细胞
        2.2.4 主要实验试剂及试剂配制
        2.2.5 主要实验器材及仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 钩体培养
        2.3.2 钩体固定
        2.3.3 钩体计数
        2.3.4 细胞复苏和传代培养
        2.3.5 细胞冻存
        2.3.6 细胞计数
        2.3.7 过表达SR-A及对照GFP的 RAW264.7 稳转巨噬细胞系的构建
        2.3.8 Western Blot检测巨噬细胞SR-A蛋白表达
        2.3.9 免疫荧光染色检测巨噬细胞表面SR-A蛋白表达
        2.3.10 RAW264.7 细胞吞噬钩体菌株56606v实验
        2.3.11 巨噬细胞表面甘露糖受体封闭
        2.3.12 钩体在小鼠腹腔巨噬细胞中存活实验
        2.3.13 免疫荧光染色检测巨噬细胞对钩体的吞噬情况
        2.3.14 激光共聚焦显微镜对免疫荧光结果的观察
        2.3.15 CCK-8 检测原代腹腔巨噬细胞活性
        2.3.16 钩体急性感染WT和 SR-A~(-/-)小鼠
        2.3.17 小鼠血清肝功能检测
        2.3.18 小鼠感染钩体3d后各组织中钩体DNA的抽提
        2.3.19 抽取钩体基因组DNA
        2.3.20 RNA抽提
        2.3.21 RNA反转成cDNA
        2.3.22 Real-time PCR
        2.3.23 数据分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 过表达SR-A或对照载体的RAW264.7 细胞中SR-A蛋白表达水平的检测
        2.4.2 过表达SR-A的 RAW264.7 巨噬细胞对钩体的吞噬能力增加
        2.4.3 甘露糖受体不是钩体56606v株的主要吞噬受体
        2.4.4 问号钩体56606v株能在小鼠腹腔巨噬细胞中存活,而56606a株不能
        2.4.5 问号钩体56606v株在SR-A~(-/-)小鼠腹腔巨噬细胞中的存活率低于WT细胞
        2.4.6 问号钩体56606v株感染WT和 SR-A~(-/-)小鼠,WT小鼠表现为更严重的皮下出血和黄疸
        2.4.7 问号钩体56606v株感染WT和 SR-A~(-/-)小鼠,SR-A~(-/-)小鼠表现为更轻微的肝功能损伤
        2.4.8 钩体56606v株感染后,WT和 SR-A~(-/-)小鼠各组织中钩体的分布情况
        2.4.9 钩体56606v株感染后,在SR-A~(-/-)小鼠组织中的载量较低
    2.5 讨论
全文总结
参考文献
致谢
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【参考文献】：
期刊论文
[1]清道夫受体A在COPD发病及进展为肺癌中的研究[J]. 谢梁,赵开顺,周敏.  国际呼吸杂志. 2017 (12)
[2]慢性阻塞性肺疾病的发病机制及中医治法的研究进展[J]. 闫玲玲,杨爱东.  中医临床研究. 2015(04)



本文编号：3730983