链霉菌CPCC 203702抗结核分枝杆菌次级代谢产物研究

发布时间：2023-05-20 12:06

　　结核病是迄今为止全世界最难控制的传染性疾病之一,近年来耐药结核病尤其是耐多药结核病和广泛耐药结核病发病率的不断上升使得结核病疫情再度严峻。由于现有的抗结核治疗方案还远远不够理想,亟需加速新型抗结核药物的研究开发。肽脱甲酰基酶(PDF)是一种细菌必需的金属酶,在蛋白质合成中起到从甲硫氨酸残基脱掉N端甲酰基的作用。PDF是细菌蛋白质合成必需的一个酶,但在真核细胞的蛋白质合成中却并不是必要的,因此,PDF成为新型抗菌药物筛选的靶点之一。微生物次级代谢产物是研制新药的重要资源之一,微生物的多样性及其代谢产物的多样性和新颖性使微生物药物在医药方面具有广阔的应用前景。本课题组利用前期建立的PDF为靶点的抗结核药物高通量筛选模型对中国药学微生物菌种保藏管理中心丰富的微生物发酵液样品库进行筛选,发现链霉菌CPCC 203702发酵液同时具有抗结核分枝杆菌和PDF酶抑制活性。本研究对链霉菌CPCC 203702进行放大发酵,以抗耻垢分枝杆菌活性和PDF抑制活性为导向,采取常规的分离纯化流程,包括硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、半制备HPLC等多种分离方法进行分离纯化,从发酵液中分离得到1...

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语一览表
前言
实验材料
    1. 菌株
    2. 主要培养基
        2.1 检定培养基
        2.2 斜面培养基
        2.3 发酵培养基
    3. 主要试剂
    4. 主要仪器
    5. 相关溶液的配制
        5.1 SDS-PAGE相关溶液
        5.2 蛋白纯化相关溶液
        5.3 酶活性检测相关溶液
        5.4 其他溶液
实验方法
    一.链霉菌CPCC 203702发酵条件摸索及放大发酵
        1. 斜面培养基的确定
        2. 发酵时间的确定
        3. 链霉菌CPCC 203702放大发酵
    二.抗耻垢分枝杆菌活性导向的次级代谢产物的分离纯化及结构鉴定
        1. 活性次级代谢产物的发现
            1.1 发酵液初步处理
            1.2 活性导向的分离纯化过程
            1.3 化合物结构解析
            1.4 化合物活性初步评价
        2. Berninamycin类抗生素新组分的发现与鉴定
            2.1 分离纯化过程
            2.2 化合物结构解析
            2.3 化合物活性初步评价
    三. 抑制结核分枝杆菌PDF活性导向的次级代谢产物分离纯化与结构鉴定
        1. 目的蛋白的纯化
            1.1 样品处理
            1.2 使用AKTA explorer系统纯化蛋白
            1.3 蛋白脱盐、脱咪唑及浓缩
            1.4 SDS-PAGE电泳检测
            1.5 蛋白浓度测定
        2. 酶活性检测
            2.1 蛋白活性测定原理
            2.2 酶活性测定步骤
            2.3 酶抑制率计算公式
        3. 活性次级代谢产物的发现
            3.1 活性导向的分离纯化过程
            3.2 化合物活性测定
    四. 其他化合物的分离纯化与结构鉴定
        1. 上清液乙酸乙酯部分
        2. 菌丝体甲醇抽提物乙酸乙酯部分
实验结果与分析
    一. 链霉菌CPCC 203702发酵条件摸索及放大发酵
        1. 斜面培养基的确定
        2. 发酵时间的确定
        3. 链霉菌CPCC 203702的放大发酵
    二. 抗耻垢分枝杆菌活性导向的代谢产物的分离纯化及结构鉴定
        1. 活性次级代谢产物的发现
            1.1 发酵液初步处理及活性结果
            1.2 活性导向的分离纯化过程
            1.3 化合物结构鉴定
            1.4 化合物活性初步评价
        2. Berninamycin类抗生素新组分的发现与鉴定
            2.1 化学结构导向的分离纯化过程
            2.2 化合物结构解析
            2.3 化合物活性的初步评价
    三. 抑制结核分枝杆菌PDF活性导向的次级代谢产物的分离纯化与结构鉴定
        1. 结核分枝杆菌PDF酶的表达与纯化
        2. 活性导向的分离纯化过程
        3. 化合物活性初步测定和结构解析
    四.其他类型化合物的分离纯化与结构鉴定
        1. 其他类型化合物的分离及化合物结构式
        2. 化合物结构鉴定
五.讨论
结论
参考文献
附图
致谢



本文编号：3821083