HIV感染者NK细胞亚群分布及调节作用的研究

发布时间：2023-05-31 21:54

　　目的:NK细胞是固有免疫系统中一类大颗粒淋巴细胞,其主要表达CD56分子和/或CD16分子,不表达CD3分子,在抗肿瘤及抗病毒反应中均起到了重要的作用,是免疫系统的第一道防线。根据其表面的不同标志物可将NK细胞划分为不同的亚群,不同的亚群发挥着不同的功能,包括细胞因子分泌、杀伤靶细胞以及免疫调节作用。单细胞测序作为一项新兴的技术,主要被应用于细胞类型鉴定、细胞异质性、信号通路差异响应及分子调控网络等方面的研究。HIV的感染会导致NK细胞亚群分布及功能的改变,但利用单细胞测序技术研究健康对照及HIV感染者总NK细胞亚群变化还尚未见报道;针对人类CD56⁺NK细胞,出现了以CD11b、CD27分子划分的新的分群方式,而在对HIV感染的研究中,有关新的分群方式来定义CD56⁺NK细胞亚群及功能的研究仍未见报道;HIV感染导致NK细胞中CD56^-CD16⁺亚群数量的增加,该亚群的杀伤功能及细胞因子分泌功能减弱,但CD56^-CD16⁺亚群是否发挥着免疫调节功能未知。...

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
英文缩略语
第一部分 :单细胞测序揭示HIV感染者总NK细胞亚群特征
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验对象
        2.2 实验材料
            2.2.1 实验试剂与耗材
            2.2.2 实验仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 外周血中分选NK细胞
            2.3.2 单细胞样本的制备及检测
            2.3.3 单细胞测序结果的分析
            2.3.4 GO及KEGG分析
    3 结果
        3.1 样本的质量控制
        3.2 健康人NK细胞基因水平的亚群分布特征
        3.3 健康人及HIV感染者NK细胞相关性分析
        3.4 HIV感染导致NK细胞功能改变
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :HIV感染者CD56+NK细胞应用CD11b CD27定义的各个亚群功能及其调节作用的研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验对象
        2.2 实验材料
            2.2.1 实验试剂
            2.2.2 实验仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 NK细胞CD11b CD27亚群分群情况的检测
            2.3.2 NK细胞CD11b CD27亚群表面受体表达情况检测
            2.3.3 NK细胞CD11b CD27亚群分泌IFN-γ、CD107 脱颗粒的检测
            2.3.4 NK细胞CD11b CD27亚群杀伤功能的检测
            2.3.5 NK细胞CD11b CD27亚群分泌IL-10、TGF-β的检测
            2.3.6 NK细胞CD11b CD27亚群Granzyme B及 Perforin存储情况的检测
            2.3.7 NK细胞CD11b CD27亚群抑制CD4+T 细胞增殖的检测
            2.3.8 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 HIV感染者CD11b⁺CD27-亚群百分比降低,CD11b^-CD27^-亚群百分比显著升高
        3.2 HIV感染者CD11b CD27定义的NK亚群活化性受体增高,但CD11b^-CD27^-NK亚群低表达活化性受体
        3.3 CD11b^-CD27^-NK亚群呈现幼稚的表型特征
            3.3.1 CD11b^-CD27^-NK亚群低表达成熟marker——CD11c
            3.3.2 CD11b^-CD27^-NK亚群低表达衰老marker——CD
            3.3.3 CD11b^-CD27^-NK亚群幼稚marker——CCR7表达高于CD11b⁺CD27^-NK亚群
        3.4 CD11b CD27定义的NK细胞亚群checkpoint点的表达水平在HIV感染者中显著升高
        3.5 CD11b^-CD27-NK亚群细胞代谢特征
            3.5.1 CD11b^-CD27^-NK亚群葡萄糖转运体表达较低
            3.5.2 CD11b^-CD27^-NK亚群脂质受体高于CD11b⁺CD27^-NK亚群
            3.5.3 CD11b^-CD27^-NK亚群氨基酸受体高于CD11b⁺CD27^-NK亚群
        3.6 CD11b^-CD27^-NK亚群分泌IFN-γ及CD107a的脱颗粒功能不良
        3.7 CD11b^-CD27^-NK亚群颗粒霉及穿孔素储存能力良好,释放能力受损
        3.8 CD11b^-CD27^-NK亚群分泌负向调节因子
        3.9 CD11b^-CD27^-NK亚群能够抑制CD4⁺T 细胞增殖
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :HIV感染者CD56^-NK细胞的变化及调节作用的研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 研究对象
        2.2 实验材料
            2.2.1 实验试剂
            2.2.2 实验仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 NK细胞亚群及分泌IL-10及TGF-β检测
            2.3.2 NK细胞、T细胞分选及IFN-γ的检测
            2.3.3 NK细胞表面PD-L1表达情况的检测
            2.3.4 CD8⁺T细胞表面PD-1表达情况的检测
            2.3.5 NK细胞IL-10及TGF-β封闭实验
            2.3.6 NK细胞PD-L1封闭实验
            2.3.7 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK细胞百分比显著增高
        3.2 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK细胞分泌高水平IL-10及TGF-β
        3.3 HIV感染者CD56^-CD16⁺NK亚群抑制CD8⁺T细胞功能
        3.4 阻断CD56^-CD16⁺NK细胞分泌的IL-10及TGF-β可部分恢复CD8⁺T 细胞功能
        3.5 CD56^-CD16⁺NK细胞通过直接接触抑制CD8⁺T细胞功能
        3.6 HIV感染未治疗患者CD56^-CD16⁺NK细胞Tigit未升高
        3.7 HIV感染者CD8⁺T 细胞高表达PD-1,CD56^-CD16⁺NK细胞高表达其配体PD-L1
        3.8 封闭CD56^-CD16⁺NK细胞高表达的PD-L1 可部分恢复CD8⁺T 细胞分泌IFN-γ功能
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3826070